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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.60.2022.tde-20072023-113231
Document
Auteur
Nom complet
Gustavo Souza dos Santos
Adresse Mail
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Ribeirão Preto, 2022
Directeur
Jury
Debonsi, Hosana Maria (Président)
Regasini, Luis Octavio
Ambrosio, Sérgio Ricardo
Furtado, Niege Araçari Jacometti Cardoso
Titre en anglais
Phaeurus antarcticus and its endophytic fungi: chemical diversity of a hidden pharmacy underneath the Antarctic Ocean
Mots-clés en anglais
Antarctic fungi
Antarctic seaweed
Antimicrobials
Immunomodulatory activity
Marine natural products
Metabolomics
Neglected diseases
Photoprotection
Resumé en anglais
Chapter I: The chemical profile and antibacterial, antiparasitic, and insecticidal activities of the seaweed P. antarcticus were investigated. The hexane extract (HX) and its fractions exhibited selective antibacterial activity against Staphylococcus aureus. Fractions HX-FC and HX-FD showed the highest antiparasitic activity against Leishmania amazonensis and Neospora caninum. The HX extract and the HX-FC fraction presented insecticidal potential against Aedes aegypti larvae. Through GC-MS analysis and the combination of multivariate statistical analyses (OPLS-DA) and the construction of molecular networks (GNPS), it was possible to annotate terpenes, steroids, fatty acids, and alcohols in the bioactive fractions. Chapter II: Using metabolomics techniques (UPLC-HRMS/1H NMR) and multivariate statistical analysis (PCA, OPLS-DA), the spatial variability of secondary metabolites of the seaweed P. antarcticus and the antibiofilm activity of extracts and fractions were evaluated against S. aureus resistant to methicillin-oxacillin (MRSA). The results revealed that the changes in the chemical profile were not site-specific and could be related to different life cycle stages of the collected algae. Porphyrins, terpenes, and carotenoids were annotated as discriminating compounds. Linoleic acid (1) and fucosterol (2) were isolated from the bioactive fractions and showed antibiofilm activity against MRSA. Chapter III: The extract and fractions of the fungus Penicillium purpurogenum were evaluated for antibacterial, antiparasitic, immunomodulatory, and photoprotective activities. The bioguided fractionation led to the isolation of six polyketides: 5,6,8-trihydroxy-4-(1'-hydroxyethyl) isocoumarin (3), aspergillumarin A (4), aspergillumarin B (5), Berkeleyacetal C (6), sescandelin (7), and vermistatin (8). Compounds 3, 4, 7, and 8 presented photostability and photoprotective activities against UVB-UVA. Compounds 3, 6, 7, and 8 presented immunomodulatory activity by down-regulating the production of reactive oxygen species in PMA-stimulated human neutrophils without cytotoxic effects. Compound 6 presented leishmanicidal activity against amastigotes of L. amazonensis. Chapter IV: The chemical profile (UPLC-HRMS/1H NMR) and antibiofilm activity against MRSA of 21 fungal strains were investigated. Among them, the fractionation of the extract of the fungus Epicoccum nigrum led to the isolation of epicorazines A-B (9-10) and C (12) as well as a new terpenoid (11). Compound 9-12 exhibited antibiofilm activity against MRSA. Among these, compound 11 showed the highest inhibition of pre-biofilm formation and rupture of the formed biofilm. Given the global context, this work sought to obtain new biotechnological products, considering the United Nations Sustainable Development Goals. The results obtained provide new information about the chemotaxonomy and biotechnological potential of Antarctic marine organisms as producers of biomolecules of pharmaceutical interest, emphasizing the importance of bioprospecting for the conservation of understudied organisms.
Titre en portugais
Phaeurus antarcticus e seus fungos endofíticos: diversidade química de uma farmácia oculta sob o oceano Antártico
Mots-clés en portugais
Antimicrobianos
Atividade imunomoduladora
Doenças negligenciadas
Fotoproteção
Fungos antárticos
Macroalgas antárticas
Metabolômica
Produtos naturais marinhos
Resumé en portugais
Capítulo I: O perfil químico e as atividades antibacteriana, antiparasitária e inseticida da alga P. antarcticus foram investigados. O extrato hexânico (HX) e suas frações exibiram atividade bacteriostática e bactericida seletiva contra Staphylococcus. aureus. As frações HX-FC e HX-FD apresentaram atividade antiparasitária frente a Leishmania amazonensis e Neospora caninum. O extrato HX e a fração HX-FC apresentaram potencial inseticida frente a larvas de Aedes aegypti. Através de análises em CG-EM, e combinação de análises estatísticas multivariadas (OPLS-DA) com a construção de redes moleculares (GNPS) foi possível anotar terpenos, esteroides ácidos graxos e álcoois nas frações bioativas. Capítulo II: Utilizando técnicas metabolômicas (CLUE-EM/RMN 1H) combinadas a análises estatísticas multivariadas (PCA, OPLS-DA) a variabilidade espacial de metabólitos secundários da alga P. antarcticus e a atividade antibiofilme dos extratos e frações foram avaliados frente a S. aureus resistente à meticilina e oxacilina (MRSA). Os resultados revelaram que as mudanças no perfil químico não foram sítio específicas e podem estar relacionadas a diferentes estágios do ciclo de vida das algas coletadas. Porfirinas, terpenos e carotenoides foram anotados como sustâncias discriminantes. O ácido linoleico (1) e o fucosterol (2) foram isolados das frações bioativas e apresentaram atividade antibiofilme frente a MRSA. Capítulo III: O extrato e frações do fungo Penicillium purpurogenum foram submetidos a avaliação das atividades antibacteriana, antiparasitária, imunomoduladora e fotoprotetora. O fracionamento bioguiado levou ao isolamento de seis policetídeos: 5,6,8-triidroxi-4-(1´-hidroxietil) isocumarina (3), aspergilumarina A (4), aspergilumarina B (5) berkeleyacetal C (6), sescandelina (7) e vermistatina (8). O potencial fotoprotetor, imunomodulador e leishmanicida das substâncias foi avaliado. As substâncias 3, 4, 7 e 8 apresentaram fotoestabilidade e atividade fotoprotetora frente a radiação UVB-UVA. As substâncias 3, 6, 7 e 8 apresentaram potencial imunomodulador, reduzindo a produção de espécies reativas de oxigênio em neutrófilos humanos estimulados pelo PMA sem efeitos citotóxicos. A substância 6 apresentou atividade leishmanicida frente a amastigotas de L. amazonensis. Capítulo IV: O perfil químico (CLUE-EM/ RMN 1H) e a atividade antibiofilme frente a MRSA de 21 linhagens fúngicas foram investigados. O fracionamento do extrato do fungo Epicoccum nigrum, levou ao isolamento das epicozarinas A - B (9-10) e C (12) e de um terpeno (11) inédito. As substâncias 9 - 12 exibiram atividade antibiofilme contra MRSA. Dentre estas, a substância 11 apresentou maior inibição da formação de pré-biofilme e ruptura do biofilme formado. Diante do contexto global, este trabalho buscou a obtenção de novos produtos biotecnológicos, considerando os Objetivos do Desenvolvimento Sustentável das Nações Unidas. Os resultados obtidos fornecem novas informações quimio-taxonômicas e potencial biotecnológico dos organismos marinhos da Antártica como produtores de biomoléculas de interesse farmacêutico, enfatizando a importância da bioprospecção para a conservação de organismos ainda pouco conhecidos.
 
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Date de Libération
2024-11-29
Date de Publication
2023-08-21
 
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