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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.87.2018.tde-18092018-172835
Documento
Autor
Nome completo
Fábio Silva de Carvalho
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2012
Orientador
Banca examinadora
Vicente, Elisabete Jose (Presidente)
Faria, Juarez Braz de
Racowski, Ilana
Título em português
Clonagem de α-amilase em S.cerevisiae por δ-integração e caracterização parcial dos clones.
Palavras-chave em português
amyE
amyEt
Biotecnologia
Enzima amilolítica
Produção de etanol
Transformação de levedura por δ-integração
Resumo em português
Neste trabalho, o gene da α-amilase de Bacillus subtilis foi clonado em S. cerevisiae, por δ-integração. Foram construídos dois vetores: 1) o gene truncado da α-amilase de B. subtilis (amyEt) com a sequência sinal própria, sob regulação do promotor e terminador ADH1 (δAmyEtδ); 2) o gene da α-amilase completo de B. subtilis (amyE), com a sequência sinal MFα de S. cerevisiae, sob a regulação do promotor e terminador PGK (δAmyEδ). Esses vetores foram empregados na transformação genética de linhagens S. cerevisiae, em co-transformação com o plasmídeo pAJ50, que permite a seleção positiva. Os clones transformantes cultivados em meio YPDA (0,5% amido) produziram halos de amilolise de diferentes tamanhos. Os que receberam o gene da α-amilase completo sob a regulação de PGK (δAmyEδ) apresentaram os melhores resultados para a hidrólise de amido. Nenhum clone teve o crescimento prejudicado em relação à linhagem controle selvagem. Estes resultados indicam que os novos vetores apresentam bom potencial para emprego na construção de linhagens industriais de S. cerevisiae.
Título em inglês
Cloning of α-amylase in S. cerevisiae by δ-integration and partial characterization of clones.
Palavras-chave em inglês
α-amylase
amyE
amyEt
Amylase enzyme
Biomass
Biotechnology
Ethanol production
Yeast transformation by δ-integration
Resumo em inglês
At the present work, the α-amylase gene from Bacillus subtilis was cloned in S. cerevisiae by δ-integration. We constructed two vectors: 1) a truncated α-amylase gene of B. subtilis (amyEt) with its own signal sequence, under the regulation of the ADH1 promoter and terminator of S. cerevisiae (δAmyEtδ), 2) a complete α-amylase gene of B. subtilis (amyE), with the signal sequence of MFα of S. cerevisiae under the regulation of PGK promoter and terminator (δAmyEδ). These vectors were used to genetic transformation in S. cerevisiae strains, in co-transformation with pAJ50 plasmid , which allows positive selection. The transformant clones grown in YPDA (0.5% starch) produced amilolise halos of different sizes. Those which received the complete -amylase gene under the regulation of PGK (δAmyEδ) showed the best results for starch hydrolysis. None of the clones had its growth capacity altered when compared to the wild type. These results indicate that these vectors have a good potential to be employed in industrial strains transformation of S. cerevisiae.
 
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Data de Publicação
2018-09-18
 
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