Antes do Ensaio do Lisado de Amebócitos do Limulus (LAL), a única forma de se avaliar a pirogenicidade em drogas parenterais e dispositivos médicos era o ensaio de pirogênio em coelhos da Farmacopéia Americana (USP). Especialmente para radiofármacos, o ensaio LAL é a escolha para a determinação de endotoxina bacteriana (pirogênio). O objetivo deste trabalho foi validar o método de formação de gel para alguns radiofármacos sem uma interferência mensurável. O guia do método LAL do Food and Drug Administration (FDA) define interferência como uma condição que causa uma diferença significativa entre os pontos finais de gelificação das séries de controle positivo da água e controle positivo do produto utilizando-se um endotoxina padrão. Os experimentos foram realizados de acordo com o teste de endotoxinas bacterianas da USP na m-iodobenzilguanidina-131I, nos radioisótopos Gálio-67 e Tálio-201, nos reagentes liofilizados DTPA, Fitato, GHA, SAH e Sn Coloidal. A Máxima Diluição Válida (MDV) foi calculada para cada produto com base na sua dose clínica e diluições seriadas abaixo da MDV foram avaliadas em duplicata para a detecção de interferências. A sensibilidade declarada do reagente de LAL foi de 0,125 UE mL-1 (Unidades de Endotoxina por mililitro). Para a validação, uma série de diluições foi feita utilizando-se padrão de endotoxina (PE) nas concentrações de 0,5 a 0,03 UE mL-1 para a confirmação da sensibilidade do reagente de LAL, em quadruplicata. A mesma série de diluições foi feita com o PE e o produto diluído 100 vezes em três lotes consecutivos de cada radiofármaco. Os produtos m-iodobenzilguanidina-131I, Gálio-67, Tálio-201, DTPA, SAH e Sn Coloidal foram compatíveis com o método no fator de diluição 1:100. Fitato e GHA apresentaram interferência no ensaio de formação de gel. Outras técnicas para determinar endotoxinas como o ensaio cromogênico (desenvolvimento de cor) e o turbidimétrico (desenvolvimento de turbidez) foram avaliadas para obter informações qualitativas e quantitativas sobre as concentrações de endotoxinas nas amostras.

Before the Limulus amebocyte lysate (LAL) test, the only available means of pirogenicity testing for parenteral drugs and medical devices was the United States Pharmacopoeia (USP) rabbit pyrogen test. Especially for radiopharmaceuticals, the LAL assay is the elective way to determine bacterial endotoxin. The aim of this work was to validate the gel clot method for some radiopharmaceuticals without measurable interference. The FDAs LALTest guideline defines interference as a condition that causes a significant difference between the endpoints of a positive water control and positive product control series using a standard endotoxin. Experiments were performed in accordance to the USP bacterial endotoxins test in the 131I- m-iodobenzylguanidine; the radioisotopes Gallium-67 and Thallium-201; the liophylized reagents DTPA, Phytate, GHA, HSA and Colloidal Tin. The Maximum Valid Dilution (MVD) was calculated for each product based upon the clinical dose of the material and a twofold serial dilution below the MVD was performed in duplicate to detect interferences. The labeled sensitivity of the used LAL reagent was 0.125 EU mL-1 (Endotoxin Units per milliliter). For validation, a dilution series was performed, a twofold dilution of control standard endotoxin (CSE) from 0.5 to 0.03 EU mL-1, to confirm the labeled sensitivity of the LAL reagent being tested in sterile and non pyrogenic water, in quadruplicate. The same dilution series was performed with the CSE and the product in the 1:100 dilution factor, in three consecutive batches of each radiopharmaceutical. The products 131I-m-iodobenzylguanidine, Gallium-67, Thallium-201, DTPA, HSA and Colloidal Tin were found compatible with the LAL test at a 1:100 dilution factor. Phytate and GHA showed some interference in the gel clot test. Other techniques to determine endotoxins as the chromogenic (color development) and the turbidimetric test (turbidity development), were also assessed to get valuable quantitative and qualitative information about the endotoxin concentration in samples.