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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.75.2009.tde-13112009-081713
Documento
Autor
Nome completo
Juliana Vieira Alberice
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Carlos, 2009
Orientador
Banca examinadora
Carrilho, Emanuel (Presidente)
Nitschke, Marcia
Seleghim, Mirna Helena Regali
Título em português
Inativação de Alicyclobacillus acidoterrestris por saponinas e detecção por reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR)
Palavras-chave em português
Alicyclobacillus acidoterrestris
RT-PCR
saponinas
Resumo em português
Alicyclobacillus acidoterrestris são bactérias termoacidófilas esporofórmicas não patogênicas e estão comumente presentes em sucos de frutas ácidas, podendo deteriorá-los. Tendo em vista a importância da atividade agrícola e seus derivados no país, como suco de laranja industrializado, o interesse no desenvolvimento de técnicas bioanalíticas que propiciem uma detecção rápida, sensível e confiável, bem como alternativas para inativação desse microrganismo, é elevado.
Neste trabalho foi testado o uso de saponina como agente inibidor de esporos e células vegetativas de A. acidoterrestris, em sucos de laranja concentrado e reconstituído. Entretanto, à temperatura ambiente a inibição é lenta, especialmente para esporos (cerca de 10 dias para inibição total), inviabilizando o seu uso na indústria de cítricos. A combinação de tratamento térmico e saponinas potencializaram a inibição da bactéria, o que torna possível sua aplicação industrial. A potencialização com temperatura alcançou 20% para esporos em suco concentrado, 28,5% para esporos em suco reconstituído e 45,1% para células vegetativas em sucos reconstituídos.
A detecção da viabilidade celular foi realizada pela reação em cadeia da polimerase por transcrição reversa (RT-PCR), que se mostrou uma técnica rápida, sensível, e quantitativamente equivalente ao método padrão de detecção, o plaqueamento de culturas, sendo o coeficiente de correlação (r) entre as técnicas de 0,9977 para esporos e 0,9987 para células vegetativas.
A quantificação dos produtos da RT-PCR foi realizada por eletroforese capilar em microchip com o equipamento Bioanalyzer 2100. O equipamento forneceu resultados confiáveis e reprodutíveis para diagnóstico de DNA transcrito de A. acidoterrestris. Além da alta sensibilidade, o equipamento permitiu um mínimo consumo de amostra (1 μL), praticidade e rapidez.
Título em inglês
Inativation of Alicyclobacillus acidoterrestris by saponins and detection by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RT-PCR)
Palavras-chave em inglês
Alicyclobacillus acidoterrestris
RT-PCR
saponins
Resumo em inglês
Alicyclobacillus acidoterrestris are termoacidophilic sporeforming nonpathogenic bacteria who are commonly present in acidic fruit juices and can deteriorate them. In view of the importance of agricultural activities in the country and its derivatives, such as industrialized orange juice the interest in the development of bioanalitycal techniques that provide early, sensitive, and reliable detection, as well as alternatives to inactivate the microorganism is elevated.
This study tested the use of saponins as an inhibitor of spores and vegetative cells of A. acidoterrestris in both concentrate and reconstituted orange juices. At room temperature, however, the inhibition is slow, especially for spores (about 10 days for a total inhibition), preventing its use in the citrus industry. The combination of heat treatment and saponins potentiated the inhibition of bacteria, which makes possible their industrial application. Optimizing the temperature reached 20% for spores in juice concentrate, 28.5% for spores in reconstituted juice and 45.1% for vegetative cells in reconstituted juices.
Detection of cell viability was performed by reverse transcription polymerase chain reaction (RT-PCR), which showed to be a fast, sensitive, and quantitative equivalent to the traditional plating technique, and the correlation coefficient (r) between the techniques were 0.9977 and 0.9987 for spores and vegetative cells, respectively.
The quantification of the products of RT-PCR was performed by capillary electrophoresis on microchip with Bioanalyzer 2100 equipment. The equipment provided reliable and reproducible results for the diagnosis of DNA transcript of A. acidoterrestris. Besides of high sensitivity, the equipment allowed minimal consumption of sample (1 μL) and provided convenience and speed of analysis.
 
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Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
JulianaAlbericeR.pdf (673.62 Kbytes)
Data de Publicação
2010-06-29
 
AVISO: O material descrito abaixo refere-se a trabalhos decorrentes desta tese ou dissertação. O conteúdo desses trabalhos é de inteira responsabilidade do autor da tese ou dissertação.
  • Alberice, Juliana Vieira, et al. Inactivation of Alicyclobacillus acidoterrestris in orange juice by Saponin extracts combined with heat-treatment [doi:10.1016/j.ijfoodmicro.2012.08.004]. International Journal of Food Microbiology [online], 2012, vol. 159, p. 130-135.
  • Alberice, Juliana Vieira, HUACCA, Maribel Elizabeth Funes, e CARRILHO, E. A comparison of plating and reverse transcriptase polymerase chain reaction followed by microchip electrophoresis for the inactivation of Alicyclobacillus acidoterrestris using saponin [doi:10.5935/0103-5053.20130272]. Journal of the Brazilian Chemical Society [online], 2013.
  • Barrios Eguiluz, Katlin Ivon, et al. Sequence-specific electrochemical detection of Alicyclobacillus acidoterrestris DNA using electroconductive polymer-modified fluorine tin oxide electrodes [doi:10.1039/b809080g]. Analyst (London) [online], 2009, vol. 134, p. 314.
  • ALBERICE, J. V., et al. Fotoinativação de Bactérias Alicyclobacillus acidoterrestris. In II Workshop em Terapia Fotodinâmica: Integração dos Aspectos Moleculares, Tecnológicos, e Aplicações na Área de Saúde, São Pedro, 2007. Livro de Resumos., 2007. Resumo.
  • ALBERICE, J. V., HUACCA, Maribel Elizabeth Funes, e Carrilho, E. Análise filogenética de alicyclobacillus ssp. em diferentes amostras de frutos ácidos e sucos comerciais pela técnica RAPD e microchips. In XIV Simpósio Internacional de Iniciação Científica da USP, São Paulo, 2006. Livro de Resumos., 2006. Resumo.
  • ALBERICE, J. V., HUACCA, Maribel Elizabeth Funes, e Carrilho, E. Uso de microchips para análises filogenéticas de Alicyclobacillus ssp. em diferentes amostras de frutos ácidos e sucos comerciais. In XIV Simpósio Internacional de Iniciação Científica da USP, São Paulo, 2006. Livro de Resumos., 2006. Resumo.
  • CAPPELINI, L. T. D., et al. Soil bacteria that utilize fipronil as the only carbon source. In SETAC North America 33rd Annual Meeting, California-EUA, 2012. Livro de Resumos., 2012. Resumo.
  • Perussi, J.R., et al. Photodynamic inactivation of Allicyclobacillus acidoterrestris with phenotiazinic dyes. In XII Congress European Society for Photobiology - ESP, Bath, England, 2007. Programme and Book of Abstracts., 2007. Abstract.
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