• JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
  • JoomlaWorks Simple Image Rotator
 
  Bookmark and Share
 
 
Tese de Doutorado
Documento
Autor
Nome completo
Gabriel Sassarão Alves Moreira
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Pirassununga, 2017
Orientador
Banca examinadora
Maia, Antonio Augusto Mendes (Presidente)
Montassier, Hélio José
Monzani, Paulo Sérgio
Pilarski, Fabiana
Sousa, Ricardo Luiz Moro de
Título em português
Identificação e expressão gênica das enzimas arginase 1, arginase 2, e citocinas pró-inflamatórias em Pseudoplatystoma corruscans e Pseudoplatystoma reticulatum, imunizados com Ichthyophthirius multifiliis
Palavras-chave em português
Ichthyophthirius multifiliis
Pseudoplatystoma spp
Expressão gênica
Imunização
Resumo em português
O protozoário ciliado Ichthyophthirius multifiliis causador da doença dos pontos brancos em muitas espécies de peixes de água doce destaca-se como um importante patógeno por ser responsável por grandes perdas para a indústria de pescados mundial. Duas espécies de peixes de grande importância para a economia no Brasil foram selecionadas para este estudo, o pintado (Pseudoplatystoma corruscans (Spix & Agassiz, 1829) e a cachara (Pseudoplatystoma reticulatum (Eigenmann & Eigenmann, 1889). Com o objetivo de avaliar a resposta imune destes peixes frente ao parasita, inicialmente, o protozoário I. multifiliis foi isolado e repicado em P. corruscans para a obtenção da forma infectante (teronte) utilizada nas imunizações. A identificação molecular dos peixes foi realizada através da amplificação e sequenciamento do gene RAG2 mostrando que as espécies puras são homozigotas enquanto o híbrido é heterozigoto para este gene. Através de PCR foi realizada ainda a caracterização parcial dos genes arginase 1, arginase 2, IL-1β, IL-8 e TNF-α dos peixes pertencentes a família Pseudoplatystoma que resultaram em amplificações de sequências com aproximadamente 530, 815, 400, 280 e 300 pb, respectivamente, que foram usadas para a construção de primers específicos utilizados nas análises de expressão gênica por PCR em tempo real (qPCR). A expressão gênica em P. corruscans e P. reticulatum imunizados com terontes vivos de I. multifiliis foram verificadas 6, 12, 18 e 24 horas após imunização, sendo retirada amostras do baço, fígado e rim anterior dos peixes. No geral a expressão dos genes destes órgãos em P. corruscans apresentam um padrão semelhante de regulação. Um aumento significativo de expressão em relação ao período de imunização foi verificado para: a arginase 2 as 6 e 18 horas no baço, as 6 h no fígado e as 6, 18 e 24 horas no rim cranial; o gene da IL1-β as 24 h no fígado e 18 h e 24 h no rim cranial; e o gene da IL-8 somente as 18 h no baço. Já os genes arginase 1 e TNFα não tiveram regulação significativa nos períodos. Para P. reticulatum observou-se que somente o baço teve aumento na regulação com diferenças significativas nos períodos para arginase 2, IL-8 e TNFα, as 6 e 18 horas, já os genes arginase 1 e IL1-β não apresentaram alterações significativa.
Título em inglês
Identification and gene expression of the enzymes arginase 1, arginase 2, and pro-inflammatory cytokines in Pseudoplatystoma corruscans and Pseudoplatystoma reticulatum, immunized with Ichthyophthirius multifiliis.
Palavras-chave em inglês
Ichthyophthirius multifiliis
Pseudoplatystoma spp
Gene expression
Immunization
Resumo em inglês
The ciliate protozoan Ichthyophthirius multifiliis has been reported in various freshwater fishes and stands out as an important pathogen for being responsible to severe losses to both food and aquarium fish production. Among the fish species explored economically in Brazil it can be highlight the pintado (Pseudoplatystoma corruscans (Spix & Agassiz, 1829) and cachara (Pseudoplatystoma reticulatum (Eigenmann & Eigenmann, 1889). At this study the parasite I. multifiliis was original isolated from a petshop infected fish and maintained by serial transmission on naive pintado (P. corruscans) to obtain the infecting form (teronte) used at immunizations. The molecular identification of fish was realized through the amplification and sequencing of RAG2 gene, were the pintado (P. corruscans) and cachara (P. reticulatum) were homozygous, while the hybrid between those fish was considered heterozygous for this gene. At the partial gene characterization from fishes belonging to the Pseudoplatystoma family, the PCR amplification result in sequences of 530, 815, 400, 280 and 300 pb of the genes arginase 1, arginase 2, IL1-β, IL-8 e TNFα respectively, which were used to construct of specific primers for the quantitative real-time PCR (qPCR). The gene expression at P. corruscans and P. reticulatum immunized with live theronts of I. multifiliis was evaluated 6, 12, 18 and 24 hours after the immunization, where it was collected samples of the spleen, liver and heady kideny. The gene expression of the organs of pintado (P. corruscans) showed similar pattern of expression. An up-regulation with statistical significance was observed for: arginase 2 at 6 and 18 hours at spleen, 6 h at kidney and 6, 18 and 24 h at head kidney; the gene of IL1-β at 24 h at spleen, 18 and 24 hours at head kidney; the gene of IL-8 at 18 h at spleen. The genes of arginase 1 and TNFα didn't showed statistical significant regulation at this experiment. At the gene expression of cachara (P. reticulatum) only the spleen had a statistical alteration after theronts immunization where the arginase 2, IL-8 and TNFα was up-regulated at 6 h and 18 h, while the arginase 1 and IL1-β didn't showed statistical alteration.
 
AVISO - A consulta a este documento fica condicionada na aceitação das seguintes condições de uso:
Este trabalho é somente para uso privado de atividades de pesquisa e ensino. Não é autorizada sua reprodução para quaisquer fins lucrativos. Esta reserva de direitos abrange a todos os dados do documento bem como seu conteúdo. Na utilização ou citação de partes do documento é obrigatório mencionar nome da pessoa autora do trabalho.
DO7489353.pdf (5.84 Mbytes)
Data de Publicação
2017-12-01
 
AVISO: Saiba o que são os trabalhos decorrentes clicando aqui.
Todos os direitos da tese/dissertação são de seus autores
Centro de Informática de São Carlos
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da USP. Copyright © 2001-2014. Todos os direitos reservados.