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Dissertação de Mestrado
Documento
Autor
Nome completo
Lícia Natal Fernandes
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2009
Orientador
Banca examinadora
Matte, Maria Helena (Presidente)
Sato, Maria Inês Zanoli
Soares, Rodrigo Martins
Título em português
Caracterização molecular de isolados de Giardia de amostras de água e esgoto provenientes do Estado de São Paulo
Palavras-chave em português
Água
Esgoto
Genotipagem
Giardia
Saúde Pública
Resumo em português
Introdução - Giardia é um protozoário que parasita o intestino de quase todas as classes de vertebrados, podendo causar giardíase. Dentre os sete agrupamentos da espécie G. duodenalis, nomeados de A a G, apenas A e B foram encontrados no homem. Por se tratar de um patógeno de veiculação hídrica, a pesquisa de cistos desse microorganismo em água e esgoto é de interesse para a saúde pública. Uma vez que os métodos convencionais utilizados para a detecção desse protozoário em amostras ambientais não permitem diferenciar os isolados de Giardia potencialmente patogênicos para o homem dos demais, o emprego de técnicas que possibilitam a caracterização molecular do parasita em questão se torna necessário, principalmente no Brasil, onde as informações sobre os genótipos de Giardia do ambiente são escassas. Objetivos - Detectar a presença e identificar os genótipos de Giardia sp. em amostras de água e esgoto provenientes do estado de São Paulo, discutindo a importância dos achados para a saúde pública, bem como elaborar uma estratégia que possibilite a realização de tal proposta. Método - Amostras de esgoto bruto (5) e tratado (6), de águas superficiais (11), de poço (3) e de nascente (1) foram coletadas e concentradas pela técnica de membrana filtrante modificada ou por centrifugação. O DNA genômico foi extraído pelo método de fenol/clorofórmio/álcool-isoamílico. A amplificação do fragmento de 890pb do gene gdh, que codifica a produção de glutamato desidrogenase, foi realizada por nested PCR, seguida por clonagem e seqüenciamento de nucleotídeos. Resultados - Onze dentre as vinte e seis amostras analisadas (42,3por cento) foram confirmadas como sendo positivas para a presença de Giardia duodenalis. Os agrupamentos A, genótipo AII, e B foram encontrados. Conclusão - Esses achados indicam que, no estado de São Paulo, isolados de Giardia associados a giardíase humana estão presentes em esgoto tratado e em água superficial e de poço, de modo que o contato com esse tipo de matriz pode representar risco para a saúde pública. Além disso, a estratégia proposta possibilita a caracterização molecular de isolados de Giardia de amostras de água e esgoto.
Título em inglês
Molecular characterization of Giardia isolates in water and sewage samples from São Paulo State
Palavras-chave em inglês
Genotyping
Giardia
Public Health
Sewage
Water
Resumo em inglês
Introduction - Giardia is a protozoan that parasitizes almost all classes of vertebrates, causing giardiasis. Among the seven assemblages of G. duodenalis, named A to G, only A and B have been found in humans by this moment. As considered a waterborne pathogen, the detection of cysts in water and sewage samples is of interest for public health. Once conventional methods are not able to distinguish Assemblages A and B of G. duodenalis from others, the application of techniques that allow a molecular characterization of Giardia isolates is an important issue, especially in Brazil, where there is scarce information about the genotypes of this parasite in the environment. Objective - To detect and identify Giardia genotypes in water and sewage samples from São Paulo state, discussing the importance of findings for public health, as well as develop a strategy that makes it possible. Method - Raw (5) and treated (6) sewage, surface (11), well (3) and spring (1) water samples were collected and concentrated by modified membrane filtration technique or centrifugation. Genomic DNA was extracted using phenol/chloroform/isoamilic alcohol method. A 890bp fragment of gdh gene, that codes the glutamate dehydrogenase production, was amplified by nested PCR. Cloning and sequencing were subsequently done. Results - 11 out of 26 (42,3 per cent) samples were confirmed to be positive for the presence of G. duodenalis. Assemblages A, genotype AII, and B were found. Conclusions - These findings indicate that, in São Paulo state, Giardia isolates associated to human giardiasis are present in treated sewage and in surface and well water. Thereby, the contact with these matrices can offer risk for public health. Besides, the approach described here allows the molecular characterization of Giardia isolates from water and sewage samples.
 
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Licia.pdf (2.01 Mbytes)
Data de Publicação
2009-09-29
 
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