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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.46.2004.tde-28112008-091425
Documento
Autor
Nome completo
Fábio Siviero
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2004
Orientador
Banca examinadora
Santelli, Gláucia Maria Machado (Presidente)
Armelin, Hugo Aguirre
Gorab, Eduardo
Monesi, Nadia
Terra, Walter Ribeiro
Título em português
Sequenciamento e análise de um banco de cDNA de glândulas salivares de Rhynchosciara americana e caracterização do gene RaDup
Palavras-chave em português
Amplificação de genes
Ciclo celular
Dipteros
Endociclos
Politenia
Rhynchosciara
Sciarídeos
Resumo em português
Durante o desenvolvimento deste projeto adotou-se como estratégia o sequenciamento de ESTs, com a finalidade de encontrar mensagens relacionadas com desenvolvimento, metabolismo e principalmente amplificação/politenização em glândulas salivares de Rhynchosciara americana, um díptero (Sciarídeo) que apresenta cromossomos politênicos e amplificação gênica rigidamente regulada ao longo do desenvolvimento larval, tanto neste tecido quanto em outros. Um total de 8193 ESTs foi gerado, estas foram anotadas e categorizadas segundo os termos do Gene Ontology Consortium, proporcionando uma visão geral do status metabólico, como em um Northern eletrônico, de um ponto importante no desenvolvimento desta espécie, quando surgem amplificações gênicas específicas e a glândula salivar necessita secretar as proteínas do casulo. Outros frutos deste seqüenciamento foram a determinação de 91 polimorfismos e a criação de uma tabela de códon usage. Diversos ESTs foram identificados com potencial envolvimento com os endociclos observados neste tecido, destes, RaDup e RaMCM5 foram selecionados para estudo. Suas regiões genômicas foram isoladas e suas localizações cromossômicas foram identificadas, em relação a RaDup, toda a porção codificante de seu mensageiro e 12kb de DNA genômico contendo seu gene foram seqüenciados, revelando sua estrutura gênica. Anticorpos foram produzidos para detectar esta proteína, gerando evidências de sua participação tanto na replicação mitótica como nos endociclos presentes nas glândulas salivares. A localização cromossômica de RaDup é um dado muito interessante, pois pela primeira vez um pufe amplificado é relacionado com um gene regulatório.
Título em inglês
Sequencing and analysis of a EST Bank from salivary glands of Rhynchosciara americana and characterization of the gene RaDup
Palavras-chave em inglês
Cell cycles
Dipteran
Endocycle
Gene amplification
Politene
Puff
Rhynchosciara
Sciaridae
Resumo em inglês
In this work EST sequencing was used as strategy to find messages related to development, metabolism and polyteny/amplification in salivary glands of Rhynchosciara americana, a dipteran (Sciaridae) that shows in this tissue giant polytene chromosomes and gene amplification tightly regulated throughout development of the larvae. A total of 8193 EST sequences were generated, annotated and categorized using Gene Ontology Consortium terms, providing a general view of the metabolic status, like an electronic Northern, of an important point in development of the larvae, that shows where specific genes are amplified and the salivary gland needs to secrete the proteins to form the cocoon. Other data include determination of 91 SNPs and a statistic of codon usage. Several ESTs were identified with potential connection to endocicles, from these RaDup and RaMCM5 were selected for further studies. Both chromosomal loci were identified and genomic regions isolated, for RaDup the coding region of its mRNA and 12kb of genomic region were completely sequenced, revealing its gene structure, and antibodies were raised against this protein, making evident data about its involvement in replication in mitotic cells and in endocicles in salivary glands. About the chromosomal locus of RaDup, it becomes very interesting, because for the first time one amplified puff can be related to a regulatory gene.
 
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Data de Publicação
2008-12-10
 
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  • SIVIERO, F., et al. Analysis of expressed sequence tags from Rhynchosciara americana salivary glands [doi:10.1111/j.1365-2583.2006.00616.x]. Insect Molecular Biology [online], 2006, vol. 15, n. 2, p. 109-118.
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