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Dissertação de Mestrado
Documento
Autor
Nome completo
Julio Cesar Levano Garcia
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2003
Orientador
Banca examinadora
Silva, Ana Claudia Rasera da (Presidente)
Marques, Marilis do Valle
Sluys, Marie Anne van
Título em português
Caracterização de Mutantes de Xanthomonas citri Gerados por Disrupção Gênica Randômica Usando Transposon
Palavras-chave em português
Bactérias anaeróbicas gram-negativas (Estudo)
Disrupção gênica
Fitopatologia
Mutação (Biologia)
Parasitos de plantas
PCR touchdown
Transposon
Xanthomonas (Estudo)
Resumo em português
Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), uma bactéria gram negativa, é a causadora da doença Cancro Cítrico que ocasiona enormes prejuizo na citricultura brasileira. Com o seqüenciamento do genoma deste patógeno foram encontradas inúmeras sequências codificadores com funções desconhecidas. Assim com a finalidade de estudos funcionais do genoma de Xac, foram gerados mutantes randômicos usando o transposon EZ::TN, que induziu disrupção aleatoria de seus genes com o intuito de avaliar que genes inativados afetam a patogenicidade da bactéria. Para o mapeamento do local de inserção do transposon foi desenvolvida uma metodologia baseada na técnica de PCR touchdown utizando oligonucleotídeos semidegenerados. A confiabilidade deste novo método foi comprovada através do mapeamento por Southem blot de alguns mutantes. Conseguiu-se mapear 90 mutantes randômicos com este método. Os testes de patogenicidade em citros mostraram mutantes com sua patogenicidade afetada observando-se variações nos sintomas da doença. Mutantes interessantes contendo uma ORF hipotética inativada ou tendo uma inserção num espaço intergênico foram achadas, sendo também detectados alguns mutantes com nocaute de genes nos seus plasmídeos pXac33 e pXac66.
Título em inglês
Characterization of Xanthomonas citri mutants generated by random gene disruption using transposon
Palavras-chave em inglês
Gene disruption
Gram-negative anaerobic bacteria (Study)
Mutation (Biology)
PCR touchdown
Plant parasites
Plant pathology
Transposon
Xanthomonas (Study)
Resumo em inglês
Xanthomonas axonopodis pv citri (Xac), a gram-negative bacteria, is the causer of the Citrus Canker disease that produces enormous losses to the brazilian citrus sector. Many coding sequences with unknown functions were found in the genome sequence of this pathogen. Therefore, with the goal of functional studies of Xac's genome, random mutants using the EZ::TN transposon, have been generated, which carry aleatory disruptions of their genes, with the aim of evaluating inactived genes that potentially affect bacterial pathogenicity. A method based in the PCR touchdown technique using semidegenerate primers was developed for the mapping of the transposon insertion site. The reliability of this new method was tested by means of mapping some mutants using Southern blot. Ninety random mutants were mapped with this method. The pathogenicity tests in citrus showed mutants with their pathogenicity affected and variations in the disease symptoms were observed. Interesting mutants containing an inactive hypothetical ORF or with an insertion in intergenic regions have been found, and also some mutants with inactivated genes in their plasmids pXac33 and pXac66 were detected.
 
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Data de Publicação
2018-05-11
 
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