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Tese de Doutorado
DOI
10.11606/T.41.2012.tde-23082012-092050
Documento
Autor
Nome completo
Adolfo José da Mota
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2012
Orientador
Banca examinadora
Nobrega, Francisco Gorgonio da (Presidente)
Okamoto, Oswaldo Keith
Gambale, Valderez
Gorab, Eduardo
Vallim, Marcelo Afonso
Título em português
Validação de uma metodologia molecular para identificação de fungos e investigação in vitro da transição dimórfica em Candida albicans
Palavras-chave em português
Candida spp.
Fatores de virulência
Fracionamento do SFB
Identificação por PCR-RFLP
Transição dimórfica
Resumo em português
A classificação de fungos microscópicos é limitada pela escassez de detalhes morfológicos e incertezas na caracterização bioquímica. Nesse trabalho desenvolvemos um método simples, baseado na amplificação de um segmento de cerca de 2.800 bares de bases seguida de digestão com DdeI e análise do padrão após eletroforese em agarose. Demonstramos que o método discrimina tão bem quanto a sequência de DNA do segmento após analisar mais de 400 amostras que foram classificadas em 33 espécies. Essa tecnologia facilita a busca por novos representantes da imensa diversidade existente, espécies que podem ser exploradas quanto ao seu valor potencial para a medicina e a indústria. Outras metodologias moleculares foram desenvolvidas para discriminar entre espécies próximas e na identificação de novas espécies. Em seguida, o trabalho esteve voltado para o desenvolvimento de um ensaio laboratorial que nos permitisse estudar a transição dimórfica em Candida albicans. Desenvolvemos dois novos ensaios, um biológico e outro sobre membrana artificial, para estudar a indução ou inibição da produção de hifas. A expressão de genes associados ao processo foi acompanhada de maneira quantitativa. Fracionando cromatograficamente o soro fetal bovino, obtivemos resultados indicativos de frações estimuladoras e inibidoras da transição morfológica.
Título em inglês
Validation of a molecular method for identification of fungi and in vitro investigation of the dimorphic transition in Candida albicans
Palavras-chave em inglês
BFS fractionating
Candida spp.
Dimorphic transition
Identification by PCR-RFLP
Virulence factors
Resumo em inglês
Fungal identification is limited by few morphological details and uncertainty in the biochemical tests. In the present work we developed a simple procedure, based upon DNA amplification of a 2,800 base pairs region followed by the amplicon digestion with DdeI and electrophoretic analyzes in agarose gels. After analyzing more than 400 samples encompassing 33 species, we demonstrate that this method discriminates as well as DNA sequencing of the region. This technology simplifies the search for new representatives among the great diversity of fungi of medical and industrial interest. We devised also molecular methods to discriminate between closely related species and described a new putative species. Next our work was dedicated to develop an in vitro assay for the study of the dimorphic transition in Candida albicans. We devised two biological assays and one that used an artificial membrane to investigate the induction and inhibition of hyphal production. The expression of genes associated with the morphological transition was examined in a quantitative way. We fractionated bovine fetal serum by column chromatography and obtained results pointing to fractions that stimulate or inhibit hyphal production.
 
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Adolfo_Mota_CORRIG.pdf (12.26 Mbytes)
Adolfo_Mota_SIMPL.pdf (160.46 Kbytes)
Data de Publicação
2012-10-23
 
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