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Tesis Doctoral
DOI
https://doi.org/10.11606/T.99.2019.tde-19122019-123455
Documento
Autor
Nombre completo
Maria Aparecida Moraes Marciano
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2019
Director
Tribunal
Chioccola, Vera Lucia Pereira (Presidente)
Lescano, Susana Angélica Zevallos
Luna, Expedito José de Albuquerque
Pinto, Pedro Luiz Silva
Título en portugués
Pesquisa de Giardia spp., Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis em água para consumo humano
Palabras clave en portugués
Água
Biologia molecular
Protozoa
Surto de doenças
Vigilância sanitária
Resumen en portugués
Segundo normas do Ministério da Saúde, toda água destinada ao consumo humano, distribuída coletivamente por meio de sistema ou solução alternativa de abastecimento, deve ser objeto de controle e vigilância. O monitoramento adequado, aliado a técnicas capazes de detectar as diferentes espécies de microrganismos fornece informações importantes sobre a fonte de infecção durante surtos epidêmicos. Estas informações contribuem para as ações de manejo e adequada tomada de decisões de gestores em saúde pública. O presente estudo teve como objetivo padronizar e implantar metodologias microscópicas e moleculares de detecção de Giardia spp, Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii e Cyclospora cayetanensis em águas destinadas ao consumo humano. Estes protozoários são considerados os mais prevalentes em surtos epidêmicos de veiculação hídrica, entretanto, o estudo e monitoramento dos mesmos são dificultados por condições intrínsecas das amostras de água. Foram padronizadas as determinações de protozoários em água para consumo humano pela avaliação dos métodos microscópicos e moleculares. Para as padronizações foram utilizados protozoários provenientes de fezes humanas (Cryptosporidium spp. e Giardia spp.), felinas (T. gondii) e DNA de C. cayetanensis. A seguir foi padronizado cada passo da PCR convencional (cPCR) e da PCR em tempo real (qPCR) (extração de DNA, iniciadores moleculares e reação de amplificação). Visando aumentar a sensibilidade, especificidade e diminuir o risco de contaminação após a amplificação do DNA foram padronizadas duas semi-nested PCR em tubo único, para Giardia spp. e Cryptosporidium spp. Os resultados mostraram que os protocolos de extração e amplificação adotados foram eficientes para a detecção desses patógenos, em amostras de água para consumo humano e podem ser aplicadas na rotina laboratorial, no atendimento de surtos epidêmicos.
Título en inglés
Research for Giardia spp., Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis in drinking water
Palabras clave en inglés
Molecular biology
Outbreaks
Protozoa
Sanitary surveillance
Water
Resumen en inglés
According to Ministry of Health rules, all water intended for human consumption, distributed collectively through a system or alternative supply solution, must be subject to control and surveillance. Proper monitoring and techniques capable of detecting different species of microorganisms provide important information on the source of infection during outbreaks. This information contributes to the management actions and proper decision making of public health managers. This study aimed to standardize and implement microscopic and molecular methodologies for detection of Giardia spp., Cryptosporidium spp., Toxoplasma gondii and Cyclospora cayetanensis in waters intended for human consumption. These protozoans are the most prevalent in water transmission and the most related to epidemic outbreaks. However, the study and monitoring of these parasites are hampered by intrinsic conditions of water samples. The determinations of protozoa in drinking water were standardized by the evaluation of microscopic and molecular methods. For standardization, protozoa from human feces (Cryptosporidium spp. and Giardia spp.), felines (T. gondii) and C. cayetanensis DNA were used. Next, each step of conventional PCR (cPCR) and real-time PCR (qPCR) (DNA extraction, molecular primers and amplification reaction) was standardized. Aiming to increase the sensitivity, specificity and reduce the risk of contamination after DNA amplification, two single-nested PCR in a single tube were standardized for Giardia spp. and Cryptosporidium spp. The results showed that the extraction and amplification protocols adopted were efficient for the detection of these pathogens in samples of water for human consumption and can be applied in the laboratory routine to attend epidemic outbreaks.
 
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Fecha de Publicación
2019-12-20
 
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