Dissertação de Mestrado

A malária é uma doença parasitária de ordem pública mundial que aflige centenas de milhões de pessoas e possui alta mortalidade anual. O Plasmodium vivax (Pv) possui a maior prevalência entre as espécies causadoras de malária. Apesar da menor taxa de mortalidade que a do Plasmodium falciparum (Pf), o Pv também pode causar malária grave. Duas vacinas baseadas na proteína circunsporozoíta (CSP) foram recentemente licenciadas para uso em crianças africanas. Contudo, ambas são específicas e funcionais apenas contra a malária causada pelo Pf. Baseado na sequência de aminoácidos da PvCSP, o grupo de pesquisa da Dra. Irene Soares, da FCF-USP gerou uma proteína recombinante (yPvCSP-All_CT epitopes) com capacidade parcialmente protetora quando testada em camundongos. Devido ao polimorfismo genético existente na PvCSP, a formulação yPvCSP-All_CT epitopes contém os 3 alelos mais frequentes no mundo para a região de repetições (VK210, VK247 e P. Vivax-like). Considerando que diferentes combinações de antígeno e adjuvante alteram significativamente a imunogenicidade e a efetividade de uma vacina, comparamos as respostas imunes humoral e celular desencadeadas pela vacinação com yPvCSPAllCT epitopes combinada com Poly I:C ou Alhydrogel. Após 3 doses de vacinação, via intramuscular e intervaladas a cada 2 semanas, as formulações com ambos adjuvantes induziram uma cinética similar de resposta humoral que apresentou grande longevidade. O pico dos títulos de anticorpos IgG anti-PvCSP ocorreu no dia 42 para o grupo vacinado com o Poly I:C e no dia 90 para Alhydrogel. A partir do dia 150, esses títulos de IgG anti-PvCSP declinaram, mas ainda foram detectados até o dia 495 em ambos os grupos. Com o Alhydrogel, a vacinação gerou uma resposta majoritariamente Th2, com altíssimos títulos de IgG1 e menor detecção para as outras subclasses. Com o Poly I:C, foi detectada uma resposta mista Th1 e Th2, sendo alta e equilibrada dos isotipos de IgG. Ainda, a vacina com Poly I:C induziu maiores títulos de IgG anti-alelos da PvCSP que a com Alhydrogel. Apesar da similaridade celular no baço, o grupo que recebeu o Poly I:C apresentou aumentada frequência de plasmócitos, células B de memória e de seus precursores em relação ao grupo que recebeu Alhydrogel. Portanto, a vacinação com yPvCSP-All_CT epitopes combinada com Poly I:C induziu uma resposta humoral e celular mais robusta que com o Alhydrogel.

Malaria is a parasitic disease of global public health concern that afflicts hundreds of millions of people and has a high annual mortality rate. Plasmodium vivax (Pv) has the highest prevalence among the species causing malaria. Despite having a lower mortality rate than Plasmodium falciparum (Pf), Pv can also cause severe malaria. Two vaccines based on the circumsporozoite protein (CSP) were recently licensed for use in African children. However, both are specific and functional only against malaria caused by Pf. Based on the amino acid sequence of PvCSP, Dr. Irene Soares' research group at FCF-USP generated a recombinant protein (yPvCSP-All_CT epitopes) with partially protective capacity when tested in mice. Due to the existing genetic polymorphism in PvCSP, the yPvCSP-All_CT epitopes formulation contains the three most frequent alleles in the world for the repeat region (VK210, VK247, and P. Vivax-like). Considering that different combinations of antigen and adjuvant significantly alter the immunogenicity and effectiveness of a vaccine, we compared the humoral and cellular immune responses triggered by vaccination with yPvCSP-AllCT epitopes combined with Poly I:C or Alhydrogel. After three doses of vaccination, administered intramuscularly at two-week intervals, formulations with both adjuvants induced a similar kinetics of humoral response that showed great longevity. The peak of antiPvCSP IgG antibody titers occurred on day 42 for the group vaccinated with Poly I:C and on day 90 for Alhydrogel. From day 150, these anti-PvCSP IgG titers declined but were still detected up to day 495 in both groups. With Alhydrogel, vaccination generated a predominantly Th2 response, with very high IgG1 titers and lower detection of other subclasses. With Poly I:C, a mixed Th1 and Th2 response was detected, with high and balanced levels of IgG isotypes. Additionally, the vaccine with Poly I:C induced higher anti-allele PvCSP IgG titers than with Alhydrogel. Despite similar cellularity in the spleen, the group that received Poly I:C showed an increased frequency of plasmocytes, memory B cells, and their precursors compared to the group that received Alhydrogel. Therefore, vaccination with yPvCSP-All_CT epitopes combined with Poly I:C induced a more robust humoral and cellular response than with Alhydrogel.