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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.9.2022.tde-29072022-211646
Documento
Autor
Nome completo
Renato Massis Souza Campos
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2022
Orientador
Banca examinadora
Ferreira, Karen Spadari (Presidente)
Batista, Patrícia Xander
Nimrichter, Leonardo
Taborda, Carlos Pelleschi
Título em português
Estudo da influência de vesículas extracelulares na resposta imune contra a esporotricose experimental
Palavras-chave em português
Agrobacterium tumefaciens
Esporotricose
HOG
Sporothrix brasiliensis
Vesículas extracelulares
Resumo em português
O gênero Sporothrix compreende diversas espécies de fungos termodimóficos que infectam humanos e felinos no Brasil, levando à esporotricose, uma micose subcutânea crônica que atualmente é endêmica em estados Brasileiros. O número de casos tem aumentado rapidamente em São Paulo e municípios, apontando para um problema de saúde pública. Durante a infecção, a resposta ao estresse nestes micro-organismos é governada, principalmente, pela proteína quinase HOG1, um importante componente da via da HOG e crucial na manutenção da homeostase celular frente a alterações de potencial osmótico, estresse oxidativo, temperatura, entre outros. Neste trabalho, S. schenckii, S. brasiliensis 5110 e S. brasiliensis M1168 demonstraram diferentes perfis de resistência no ensaio de estresse celular, principalmente em meios contendo NaCl, SDS, Congo Red, Calcofluor-White e H2O2, evidenciando as diferenças fisiológicas entre as cepas e a possível atuação da HOG1 nos diferentes cenários. Utilizando o protocolo de transformação mediada por Agrobacterium tumefaciens, conseguimos, pela primeira vez, estabelecer uma metodologia confiável para transformar S. brasiliensis (SbATMT). Obtivemos 214 isolados transformantes com a estabilidade mitótica após 5 passagens em meio seletivo de 18% e dois isolados com possível redução da expressão de HOG1 (p38) após análise preliminar. O isolado ΔHOG1-AS2 demonstrou aumento da resistência a calcofluor white (CFW) ao passo que o isolado ΔHOG1-AS4 apresentou crescimento reduzido em meio com cloreto de sódio (NaCl).
Título em inglês
Study of the influence of extracellular vesicles on the immune response against experimental sporotrichosis
Palavras-chave em inglês
Agrobacterium tumefaciens
Extracellular vesicles
HOG
Sporothrix brasiliensis
Sporotrichosis
Resumo em inglês
The genus Sporothrix comprises several species of thermo-dimorphic fungi that infect humans and felines in Brazil, leading to sporotrichosis, a chronic subcutaneous mycosis that is currently endemic in Brazilian states. The number of cases has increased rapidly in São Paulo and municipalities, pointing to a public health problem. During infection, the stress response in these microorganisms is mainly governed by the HOG1 protein kinase, an important component of the HOG pathway and crucial in the maintenance of cell homeostasis in the face of changes in osmotic potential, oxidative stress, temperature, among others. In this work, S. schenckii, S. brasiliensis 5110 and S. brasiliensis M1168 demonstrated different resistance profiles in the cell stress assay, mainly in media containing NaCl, SDS, Congo Red, Calcofluor-White and H2O2, showing the physiological differences between the strains and the possible role of HOG1 in these different scenarios. Using the Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation protocol, we were able, for the first time, to establish a reliable methodology to transform and insert genetic material on S. brasiliensis (SbATMT). We obtained 214 transforming isolates with mitotic stability after 5 passages of about 18% in selective medium and two isolates with possible reduction of HOG1 (p38) expression after preliminary analysis. The ΔHOG1-AS2 isolate showed increased resistance to calcofluor-White stain (CFW) while the ΔHOG1-AS4 isolate showed reduced growth in medium with sodium chloride (NaCl).
 
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Data de Publicação
2022-08-22
 
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