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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.9.2003.tde-25082022-091710
Documento
Autor
Nome completo
Émersom Silva Lima
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2003
Orientador
Banca examinadora
Abdalla, Dulcineia Saes Parra (Presidente)
Di Mascio, Paolo
Krieger, Marta Helena
Laurindo, Francisco Rafael Martins
Oliveira, Marcelo Ganzarolli de
Título em português
Detecção e caracterização de lipídios nitrados no plasma e nas lipoproteínas humanas
Palavras-chave em português
Bioquímica clínica
Lipídeos (Metabolismo; Determinação)
Lipoproteínas (Metabolismo)
Resumo em português
O óxido nítrico (NO) e outras espécies reativas do nitrogênio reagem com radicais lipídicos gerando lipídios nitrados (LNs) aos quais têm sido atribuídas diversas ações antiaterogênicas. Contudo, apesar de diversos estudos terem demonstrado a formação de LNs em sistemas isolados, até então, a detecção destes produtos em amostras humanas não havia sido descrita. No presente trabalho foram realizadas a síntese, a caracterização química, a detecção em plasma e lipoproteínas humanas e a avaliação da atividade de liberação de NO; do nitrolinoleato (LNO2), nitrohidroxilinoleato (LNO2OH) e nitrolinoleato de colesterol (ChLNO2), derivados do ácido linoleico, seu hidroperóxido e do linoleato de colesterol, respectivamente. Os LNs foram sintetizados in vitro, purificados com cromatografia em coluna ou cromatografia de camada delgada e caracterizados por cromatografia liquida acoplada à espectrometria de massa seqüencial com ionização por eletrospray (LC-ESI/MS/MS), espectroscopia de infravermelho e ressonância magnética nuclear. Os LNs foram detectados no plasma e nas lipoproteínas por LC-ESI/MS/MS. A liberação de NO pelos produtos sintetizados foi confirmada pela análise direta do NO por quimiluminescência; por ressonancia paramagnética eletrônica (RPE), através da análise do complexo formado pela reação do NO liberado com spin traps (Fe-MGD2, Carboxi-PTIO e DBNBS) e pelo efeito do vasorelaxamento em anéis aórticas de ratos. As análises quantitativas demostraram a presença de níveis mais elevados de LNO2 e LNO2OH no plasma de indivíduos hiperlipidêmicos em relação a normolipidêmicos, detectando-se também ChLNO2 no plasma e nas frações lipoproteicas de indivíduos normolipidêmicos. Os produtos sintetizados liberaram ·No detectado por quimiluminescência, resultado que foi confirmado pelos experimentos de RPE. Os lipídios nitrados também induziram relaxamento independente do endotélio, o qual foi inibido pela presença de ODQ, um inibidor da guanilato ciclase solúvel. A presença de LNs foi então pela primeira vez descrita em plasma e nas lipoproteínas humanas. Estes achados podem tanto comprovar o papel antioxidante do NO in vivo e/ou representar um mecanismo compensatório de proteção durante o estresse nitrativo/oxidativo presente nas hiperlipidemias.
Título em inglês
Detection and characterization of nitrated lipids in human blood plasma and lipoproteins
Palavras-chave em inglês
Bioquímica clínica
Lipídeos (Metabolismo; Determinação)
Lipoproteínas (Metabolismo)
Resumo em inglês
Nitric oxide (NO) and NO-derived reactive species react with lipidic radicals to generate nitrated species. Several in vitro studies have described nitrated lipid-derived products. However, the presence of the nitrated lipids in human biological samples has not been demonstrated yet. Herein, we report the synthesis, purification, characterization, bioactivity of NO release and detection of nitrated derivatives of the linoleic acid (LNO2) linoleic acid hydroperoxide (LNO2OH) and cholesteryl linoleate (ChLNO2) in human blood plasma and lipoproteins using a high-pressure liquid chromatography coupled to electrospray ionization tandem mass spectrometry method (LC-ESI/MS/MS). The nitrated products were synthesized in vitro, purified by column liquid chromatography or thin liquid chromatography before characterization analyses. NO release analyses was performed using quimiluminescence, electron paramagnetic resonance analysis of NO-spin trap complex (Fe-MGD2, Carboxy-PTIO, DBNBS) and by induction effect of endothelium-independent relaxation in rat aortic rings. Stable products, showing the same chromatographic characteristics and fragmentation pattern as those LNO2, LNO2OH and ChLNO2 synthesized standards, were found in human blood plasma and lipoproteins of normolipidemic and hyperlipidemic subjects. The synthesized standards released NO spontaneously, which was enhancing by ascorbate and inhibited by hemoglobin and carboxy-PTIO, besides to relax the rat aortic rings. The presence of this novel nitrogen-containing lipid adduct was by the first time detected in human biological samples. It may represent a potential antioxidant role that NO or its metabolites play during in vivo lipid oxidation, through the generation of a probably protection compensatory mechanism against the nitrative/oxidative stress found in the hyperlipidemia.
 
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Data de Publicação
2022-08-25
 
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