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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.9.2018.tde-16012018-152210
Document
Author
Full name
Lílian Ferri Passadore
E-mail
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2005
Supervisor
Committee
Cunha, Regina Ayr Florio da (President)
Melhem, Marcia de Souza Carvalho
Takei, Kioko
Title in Portuguese
Caracterização das espécies Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum e Mycoplasma hominis através do cultivo e da PCR e detecção da heterogeneidade gênica da espécie Mycoplasma hominis por RAPD em amostras clínicas
Keywords in Portuguese
Microbiologia médica
Mycoplasma
Reação em cadeia por polimerase (Técnicas)
Técnicas de diagnóstico obstétrico e ginecológico
Abstract in Portuguese
O presente estudo teve como objetivo a caracterização genômica das espécies: Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum em amostras cervicais de gestantes. Cepas de Mycoplasma hominis e de Ureaplasma spp., foram identificadas através do cultivo e por PCR utilizando-se primers genéricos e específicos. Os achados na literatura são contraditórios quanto a participação dessas bactérias nas doenças humanas, especialmente quanto a participação destas em casos de infertilidade e alterações perigestacionais. Considerando a marcante heterogeneidade das cepas de Mycoplasma hominis, utilizamos a reação de RAPD com a finalidade de definir os perfis genômicos das cepas isoladas. A caracterização dos biótipos 1 e 2 do gênero Ureaplasma, respectivamente, Ureaplasma urealyticum e Ureaplasma parvum, através da análise da MBA (Múltipla Banda Antigênica) por PCR, teve como finalidade determinar a predominância de cada uma dessas espécies. Foram estudadas amostras de material cervical de 163 gestantes em várias idades gestacionais. Os resultados obtidos neste trabalho foram: M. hominis foi detectado em 14,7% (24/163) das amostras, sendo a RAPO realizada em 7 das amostras positivas e puras de M. hominis. A reação RAPD demonstrou similaridade do perfil gênico entre as amostras 3 e 4 e entre as amostras 6 e 8, enquanto que as amostras 2, 5 e 7 demonstraram uma grande heterogeneidade. O gênero Ureaplasma foi isolado em 54,6% (89/163) das amostras, sendo 31,5% (28/89) cepas de U. urealyticum e 68,5% (61/89) U. parvum. Foram detectados 10,4% (17/163) casos de co-infecções M. hominis e Ureaplasma spp. O estudo da suscetibilidade das cepas isoladas frente a tetraciclina foi realizado com o intuito de se determinar a freqüência de cepas resistentes a essa droga. Considerando ser este antibiótico o de eleição no tratamento das micoplasmoses humanas e devido aos altos índices de resistência apresentados, resistência esta conferida pela presença do plasmídeo tetM, submetemos nossas amostras à pesquisa deste plasmídeo através da PCR. A presença do plasmídeo tetM foi detectada em 29,5% (7/24) das amostras positivas para Mycoplasma hominis e em 60,7% (54/89) das amostras positivas para Ureaplasma spp., sendo que dentre estas, 57,4% (31/54) foram detectados na espécie U. parvum e 42,6% (23/54) na espécie Ureaplasma urealyticum. O estudo da heterogeneidade intra-espécie das cepas de Mycoplasma hominis pela técnica de RAPD é inédito no Brasil. Da mesma maneira a caracterização das espécies do gênero Ureaplasma em U. parvum e U. urealyticum, através da PCR pela análise da MBA, foi pioneiramente realizada pelo nosso grupo de pesquisa. Esperamos com esse trabalho poder contribuir para um conhecimento melhor da freqüência dessas espécies na nossa população e tentar explicar as divergências das avaliações nas interações entre os micoplasmas e o hospedeiro.
Title in English
Characterization of the species Ureaplasma urealyticum, Ureaplasma parvum and Mycoplasma hominis through culture and PCR and detection of the genetic heterogeneity of the species Mycoplasma hominis by RAPD in clinical samples
Keywords in English
Medical microbiology
Mycoplasma
Obstetric and gynecological diagnostic techniques
Polymerase chain reaction (Techniques)
Abstract in English
The objective of this study was to characterize the species Mycoplasma hominis, Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum in cervical samples from pregnant women. Strains of Mycoplasma hominis and Ureaplasma spp., were identified by means of culture and by PCR using generic and specific primers. The findings in the literature with regard to the involvement of these bacteria in human diseases are contradictory, especially regarding their involvement in cases of infertility and perigestational changes. In view of the strong heterogeneity among Mycoplasma hominis strains, we used RAPD to define the profiles of the strains isolated. Biotypes 1 and 2 of the genus Ureaplasma - Ureaplasma urealyticum and Ureaplasma parvum respectively - were characterized by means of MBA (Multiple Banded Antigenic) analysis using PCR to determine the predominance of each of these species. Samples of cervical material from 163 pregnant women at various stages of pregnancy were studied. The results obtained in this study were: M. hominis was detected in 14.7% (24/163) of the samples, and RAPD analyses carried out in 7 M. hominis strains. The RAPD similarly gene profile was showed: between strains 3 and 4, and between strains 6 and 8. The strains 2, 5 and 7 showed a pronounced heterogeneity in the gene profile. The genus Ureaplasma was isolated in 54.6% (89/163) of the samples, of which 31.5% (28/89) were U. urealyticum and 68.5% (61/89) U. parvum. Mycoplasma hominis and Ureaplasma spp., coinfection were detected in 10.4% (17/163) of the samples. The study of the susceptibility of the isolated strains to tetracycline was carried out with a view to determining the frequency of strains resistant to this drug. As this is the antibiotic of choice in the treatment of human mycoplasmoses, and in view of the high resistance indices observed, which are conferred by the presence of the "tetM" plasmid, we looked for this plasmid in our samples using PCR. The presence of the tetM plasmid, was detected 57,1% (4/7) of the Mycoplasma hominis - positive samples and in 40,2% (29/72) of the Ureaplasma spp - positive samples. Of the latter, 41,6% (25/72) were detected in the species U. parvum and 33,4% (4/12) were detected in the species Ureaplasma urealyticum. This is the first time that a study of the intraspecies heterogeneity of Mycoplasma hominis strains using RAPD has been carried out in Brazil. Characterization of the genus Ureaplasma species into U. parvum and U. urealyticum by means of PCR using MBA analysis was likewise pioneering effort by our research group. We hope that our work will contribute to a greater knowledge of the frequency of these species in our population and that it will help to explain differences in the assessment of the interaction between mycoplasma and the host.
 
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Publishing Date
2018-01-16
 
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