Estudos prévios demonstraram alterações bioquímicas em duas variantes da glicose-6-fosfato desidrogenase (G6PD) com atividade enzimática normal (classe 4), a Gd+ Cuiabá e Butantan. Na Gd+ Cuiabá o Km era elevado para G6P e para Gd+ Butantan o Km era elevado para G6P e NADP. Este trabalho teve por objetivo caracterizar molecularmente tais variantes. Propôs-se iniciadores que flanqueassem regiões menores, e que foram otimizados para as reações da PCR para SSCP e sequenciamento do DNA genômico e região promotora, para RFLP na determinação dos haplótipos, e para sequenciamento do RNA e sua expressão pela PCR em Tempo Real. Utilizou-se como parâmetro para os haplótipos e para otimização destas reações, 30 amostras deficientes e 32 controles normais GdB+. Os resultados demonstraram que ambas as variantes apresentaram sequência codificadora do DNA, região promotora e RNA mensageiro similares à GdB+. O haplótipo correspondente respectivamente aos seis sítios polimórficos do éxon 5 (376 A→G), do Íntron 5 (nt611C→G), do íntron 8 (nt163C→ T), do éxon 10 (nt116G→A) e do éxon 11 (nt1311C→T) para Bcll, e do íntron 11 (nt93T→C) para a Gd+ Cuiabá foi tipo Ia (- - + + - +) e para a Gd+ Butantan tipo I (- - + + - -), ambos associados aos haplótipos encontrados no grupo controle GdB+. Isto sugere que as eventuais causas das suas alterações bioquímicas tenham ocorrido a partir de algum evento após tradução protéica, sendo provavelmente de ordem epigenética. A expressão do RNA da Gd+ Cuiabá foi semelhante àquela do controle GdB+, enquanto que a da Gd+ Butantan foi em torno de 33% mais baixa.

Previous studies have shown biochemical alterations in two class 4 variants of glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PD), Gd+ Cuiabá and Gd+ Butantan. Km for G6P was elevated in Gd+ Cuiabá, and Gd+ Butantan showed elevated Km for G6P and NADP. Exons 2 to 13 as well as the promoter region of G6PD gene were amplified by PCR for SSCP and entire DNA of both variants were performed. PCR for RFLP to determine the haplotypes associations, for SSCP, RNA sequencing and expression by Real Time PCR were optimized, by studying thirty G6PD deficient samples and 32 GdB+ controls. Our results showed that Gd+ Cuiabá and Butantan gene, promoter and mRNA sequences were similar to GdB+. The haplotype for six intragenic restriction fragment length studied: nt376A→G (exon 5); nt611C→G (intron 5); nt163C→T (intron 8); nt116G→A {exon 10); nt1311 C→T (exon 11) and nt93T→C (intron 11) was type la (- - + + - +) for Gd+ Cuiabá and type I (- - + + - -) for Gd+ Butantan, both corresponding to GdB+ contral group haplotype. Therefore, our results may sugest that the biochemical alteration of these variants may be ascribed to pos-translational changes. The RNA expression for Gd+ Cuiabá was normal, and for Gd+ Butantan was 33% less than control sample.