No presente estudo avaliamos comparativamente a antigenicidade de quatro proteínas recombinantes correspondentes à região C-terminal da Proteína 1 de Superfície do Merozoíta (MSP1₁₉) e duas proteínas recombinantes derivadas do Antígeno 1 de Membrana Apical (AMA-1) de Plasmodium vivax. Vários aspectos da resposta imune naturalmente adquirida ao P. vivax foram avaliados em indivíduos de áreas endêmicas de malária visando contribuir para o diagnóstico sorológico e para o desenvolvimento de uma vacina contra as formas sanguíneas de P. vivax. Inicialmente, desenvolvemos um ensaio imunoenzimático (ELISA), usando como antígenos quatro proteínas recombinantes derivadas da região C-terminal da MSP1 de P. vivax (MSP1₁₉) produzidas a partir de diferentes vetores de expressão. Três proteínas recombinantes foram expressas em E. coli e uma em Pichia pastoris. Estas proteínas foram comparadas quanto ao reconhecimento por anticorpos IgG de 200 pacientes infectados por P. vivax, 53 indivíduos africanos expostos ao P. falciparum, 128 indivíduos com outras doenças não relacionadas à malária e 49 indivíduos normais. A sensibilidade total obtida no ensaio foi de 95% e a especificidade variou de 97,7 a 100%. Os nossos resultados demonstram que um ELISA utilizando uma única proteína recombinante baseada na MSP1₁₉ pode ser utilizado como base para o desenvolvimento de um método sorológico de detecção da malária causada por P. vivax. Posteriormente, expressamos em E. coli uma proteína recombinante correspondente a AMA-1 de P. vivax (His₆-AMA-1) e avaliamos o reconhecimento imune desta por soros de indivíduos de área endêmica de malária. A frequência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgM e IgG específicos contra a proteína recombinante His₆-AMA-1 foi de 48,5% e 85%, respectivamente. A freqüência de indivíduos que apresentaram anticorpos IgG contra His₆-AMA-1 ou PV66/AMA-1 produzida em Pichia pastoris foi similar. A subclasse de anticorpo IgG específico para His₆-AMA-1 foi predominantemente IgG1. Os ensaios de inibição utilizando as duas proteínas recombinantes derivadas de AMA-1 (His₆-AMA-1 e PV66/AMA-1) indicam a presença de epítopos de reatividade cruzada assim como específicos para os dos antígenos. Nossos resultados sugerem que a proteína recombinante His₆-AMA-1 produzida em E. coli mantém suas propriedades antigênicas e pode ser utilizada, assim como a MSP1₁₉, para estudos imuno-epidemiológicos em áreas endêmicas de malária.

In the present study, we evaluated comparatively the antigenicity of four recombinant proteins corresponding the C-terminal region of the Merozoite Surface Protein-1 (MSP1₁₉) and two recombinant proteins derived from Apical Membrane Antigen-1 (AMA-1) of Plasmodium vivax. Several aspects of the naturally acquired immune responses to the P. vivax were evaluated in individuals from malaria endemic areas aiming at contribute to the serological diagnosis and to the development of a vaccine against erythrocytic stages of malaria. Initially, we developed an immune-enzymatic assay (ELISA) using as antigens four recombinant proteins derived from the C-terminal region of P. vivax MSP-1 (MSP1₁₉) produced from the different expression vectors. Three recombinant proteins were expressed in Escherichia coli and a fourth in Pichia pastoris. These proteins were compared with regard the recognition by IgG antibodies from 200 patients infected with P. vivax, 53 african individuals exposed to Plasmodim falciparum, 128 individuals with other diseases not related to the malaria and 49 healthy individuals. Overall, the sensitivity obtained in the assay was 95% and the specificity values varied from 97.7 to 100%. Our study demonstrated that an ELISA using a single recombinant protein of the MSP1₁₉ can be used as the basis for the development of a valuable serological assay for the detection of P. vivax malaria. Subsequently, we expressed in E. coli a recombinant protein corresponding to the AMA-1 of P. vivax (His₆-AMA-1) and evaluated the immune recognition of this antigen by serum from individuals from malaria endemic areas. The frequency of individuals who presented specific IgM and IgG antibodies specific for the recombinant protein His₆-AMA-1 were 48.5% and 85%, respectively. The frequency of individuals who presented IgG antibodies to His₆-AMA-1 or to PV66/AMA-1 produced in Pichia pastoris was similar. The subclass of specific IgG antibody to His₆-AMA-1 was predominantly IgG1. Inhibition assays using the two recombinant antigens derived from AMA-1 (His₆-AMA-1 and PV66/AMA-1) indicated the presence of cross-reactive epitopes, as well as specific ones. Our results suggest that the recombinant protein His₆-AMA-1 produced in E. coli maintains some of its antigenic properties and can be utilized in the same way as MSP1₁₉ to immuno-epidemiological studies in malaria endemic areas.