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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.9.2001.tde-02052023-104255
Documento
Autor
Nome completo
Renata Cristina Godry
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2001
Orientador
Banca examinadora
Cunha, Regina Ayr Florio da (Presidente)
Gruber, Arthur
Verlengia, Rozangela
Título em português
Detecção de espécies incomuns de micoplasmas e do plasmídeo de resistência "tetM" em material cervical de gestantes por técnicas moleculares
Palavras-chave em português
Imunologia clínica (Técnicas moleculares)
Técnicas de diagnóstico obstétrico e ginecológico
Resumo em português
Até o momento são contraditórios os dados da literatura internacional quanto a participação dos micoplasmas nas doenças humanas, especialmente o envolvimento de espécies do gênero Ureaplasma spp. e da espécie Mycoplasma hominis em casos de infertilidade e alterações perigestacionais. Ao considerarmos dados recentes da literatura reportando a existência de espécies menos isoladas de micoplasmas, Mycoplasma penetrans, Mycoplasma genitalium e Mycoplasma fermentans em pacientes HIV positivos em nossa população, foi proposto através deste trabalho, mostrar uma visão geral da participação destas espécies mais incomuns, além de Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum e M. hominis em gestantes. Foi também nosso objetivo nas cepas isoladas, verificar a existência do plasmídeo tetM responsável pela resistência à tetraciclina observada em casos de infecção persistente. Foram avaliadas amostras de material cervical de 117 gestantes em várias idades gestacionais, que compreendeu: o cultivo com identificação e quantificação dos isolados e PCR (Reação em Cadeia pela Polimerase), utilizando-se "primers" genéricos e específicos para cada espécie. Para isso, foram utilizadas técnicas e procedimentos já padronizados na literatura internacional. Os dados analisados demonstraram a presença de todas as espécies de micoplasmas pesquisadas na população estudada. Resultados do cultivo das amostras clínicas em meios sólidos e líquidos mostraram uma alta taxa de positividade de 63,2% (74/117). Destes, Ureaplasma spp. estava presente em 91,9% (68/74) das pacientes, as quais foram detectadas em concentrações significativas; maiores ou iguais a 104 CCU/mL em 82,4% (61/74) das pacientes através da técnica de microtitulação em meio líquido U10. Foram observados 6,8% (5/74) de co-infecção entre Ureaplasma spp. e Mycoplasma spp. e em apenas 1,3% (1/74) Mycoplasma spp., sendo todas superiores ou iguais a 103 CCU/mL. A taxa de infecção obtida através da PCR em nosso estudo foi de 73,5% (86/ 117) para micoplasmas, sendo 2,3% (2/86) positivos somente para Mycoplasma penetrans; 7,0% (6/86) para Mycoplasma fermentans; 4,7% (4/86) para Mycoplasma hominis; 54,7% (47/86) para Ureaplasma spp. e 31,3% (27/86) para as co-infecção. Nestas co-infecções foram encontrados: 3,7% (1/27) para M. penetrans e Ureaplasma spp.; 14,8% (4/27) para M. genitalium e Ureaplasma spp.; 33,3% (9/27) para M. fermentans e Ureaplasma spp.; 11, 1 % (3/27) para M. genitalium e M. fermentans; 18,6% (5/27) para M. hominis e Ureaplasma spp.; 11,1 % (3/27) para M. fermentans, M. genitalium e Ureaplasma spp.; 3,7% (1/27) para M. genitalium, M. hominis e Ureaplasma spp. e 3,7% (1/27) para M. fermentans, M. hominis e Ureaplasma spp. Na avaliação individual das espécies através da PCR, M. penetrans foi detectado em 3/86 (3,5%) amostras, M. genitalium ocorreu em 12,8% (11/86); M. fermentans em 25,6% (22/86) das pacientes; M. hominis foi positivo para 12,8% (11/86) e a detecção de Ureaplasma spp. por esta técnica revelou uma prevalência de 82,6% (71/86) das amostras. Destes, 76,0% (54/71) identificados como Ureaplasma parvum e 12, 7% (9/71) como Ureaplasma urealyticum e 11,3% (8/71) de co-infeção entre as amostras dos biotipos. Dentro da identificação dos sorotipos de Ureaplasma parvum, mostramos uma positividade de: 7,4% (4/54) para o sorotipo 1; 25,9% (14/ 54) para o sorotipo 6; 35,2% (19/ 54) para os sorotipos 3/14. Co-infecções entre os sorotipos foram observados. Os resultados da determinação dos subtipos de Ureaplasma urealyticum demonstraram subtipo 2; subtipo 1/3 e algumas co-infecções. A presença do plasmídeo de resistência "tetM' foi investigada através da PCR, em todas as amostras positivas para Mycoplasma hominis e Ureaplasma spp., sendo observada em 4/11 (36,4%) dos Mycoplasma hominis e 42/71 (59,2%) de Ureaplasma spp.. A detecção do tetM torna-se importante na avaliação do tratamento a ser empregado, uma vez que tem sido observado um aumento na freqüência da resistência dos micoplasmas às tetraciclinas e seus derivados. No Brasil, este estudo foi inédito e acreditamos poder contribuir para um melhor entendimento do papel dos micoplasmas nas patologias humanas. Estes dados sobre a presença de espécies como M. penetrans, M. genitalium, a alta incidência de M. fermentans e a detecção de M. hominis e Ureaplasma spp., assim como as co-infecções, confirmam a alta frequência destes microrganismos em nosso meio. Ainda pouco se conhece sobre o real papel dos micoplasmas na infecção materna e suas consequências, todavia, com este estudo esperamos demonstrar a importância de um estudo mais amplo de várias espécies de micoplasmas em nossa população.
Título em inglês
Detecção de espécies incomuns de micoplasmas e do plasmídeo de resistência "tetM" em material cervical de gestantes por técnicas moleculares
Palavras-chave em inglês
Imunologia clínica (Técnicas moleculares)
Técnicas de diagnóstico obstétrico e ginecológico
Resumo em inglês
The international literature is still concerning about the mycoplasma participation in human diseases mainly in what refer to the involvement of species like the Ureaplasma spp. and the Mycoplasma hominis in cases of infertility and perigestational altering. Studying the recent literature that reported the presence of less isolated mycoplasma species, Mycoplasma penetrans, Mycoplasma genitalium and Mycoplasma fermentans of HIV patients in our population, brought us the idea of this general picture study showing the less common species in cases of pregnant women, in addition to the Ureaplasma parvum, Ureaplasma urealyticum and M. hominis. We were have to trying to analyze the presence of the plasmid tetM in the isolated strains, responsible for the resistance of tetracycline observed in cases of persistent infection. Samples of the cervical material of 117 pregnant women during various pregnancy stages were evaluated. The procedure was to have the culture with identification and quantification of the isolated and PCR (Polymerase Chain Reaction), utilizing generic and specific "primers" for each one of the species. Toward this, techniques and procedures, which were already standardized by the international literature, were used. These analyzed data have shown the presence of all the mycoplasma species that were under research in the population of this study. The results of the clinical samples culture in solid as well as in liquid means have shown a high presence rate of 63,2% (74/117) in it. Among them, Ureaplasma spp. was present in 91 ,9% (68/74) of the patients, in which it was detected in significant concentrations; higher or equal to 104 CCU/µL in 82,4% (61/74) of the patients through the microtitration technique in U10 liquid means. It was observed 6,8% (5/74) of co-infection between Ureaplasma spp. and Mycoplasma spp. and in only 1,3% (1/74) Mycoplasma spp., all of them higher or equal to 103 CCU/µL. The infection rate obtained by the PCR in our study was of 73,5% (86/ 117) for mycoplasmas, and it has shown to be 2,3% (2/86) positive only for Mycoplasma penetrans; 7,0% (6/86) for Mycoplasma fermentans; 4,7% (4/86) for Mycoplasma hominis; 54,7% (47/86) for Ureaplasma spp. and 31,3% (27/86) for the co-infection. In these co-infections it was seen: 3,7% (1/27) for M. penetrans and Ureaplasma spp.; 14,8% (4/27) for M. genitalium and Ureaplasma spp.; 33,3% (9/27) for M. fermentans and Ureaplasma spp; 11, 1% (3/27) for M. genitalium and M. fermentans; 18,6% (5/27) for M. hominis and Ureaplasma spp.; 11,1 % (3/27) for M. fermentans, M. genitalium and Ureaplasma spp.; 3,7% (1/27) for M. genitalium, M. hominis and Ureaplasma spp. e 3,7% (1/27) for M. fermentans, M. hominis and Ureaplasma spp.. M. penetrans was detected in 3/86 (3,5%) samples, M. genitalium was found in 12,8% (11/86); M. fermentans in 25,6% (22/86) of the patients; M. hominis was positive in 12,8% (11/86) and detecting the Ureaplasma spp. through this technique has shown us its prevalence in 82,6% (71/86) of the samples. Among them, 76,0% (54/71) were identified as Ureaplasma parvum and 12,7% (9/71) as Ureaplasma urealyticum and 11,3% (8/71) of co-infection on the biotype samples.It was shown in the Ureaplasma parvum sera-type process, 7,4% (4/ 54) positive for sera-type 1; 25,9% (14/ 54) for sera-type 6; and 35,2% (19/ 54) for the sera-types 3/14. Co-infections between the seratypes were observed. The results of the subtype process concerning the Ureaplasma urealyticum have shown subtype 2, subtype 1/3 and some coinfections. The presence of the tetracycline resistance plasmid "tetM" was studied through the PCR in all the samples which were positive for Mycoplasma hominis and for Ureaplasma spp., and it was observed in 4/11 (36,4%) of the Mycoplasma hominis and 42/71 (59,2%) of the Ureaplasma spp. cases. The presence of the tetM is important in the evaluation of the treatment to be prescribed since it has been observed that the resistance of the mycoplasma to the tetracycline and its derivations has been more frequent. In Brazil, this was a pioneer study and we believe it can contribute for a better knowledge about the mycoplasma role in human pathologies. These data about the presence of species like the M. penetrans, M. genitalium, the high incidence of M. fermentans and the detection of M. hominis and Ureaplasma spp., as well as the co-infections, confirm the high incidence of these microorganisms in our environment. We have still known little about the actual role of the mycoplasmas infecting pregnancy and the consequences they will bring them, however we hope that through this study we will emphasize how important it is to conduct a wide research about the several species of mycoplasmas affecting our population.
 
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Data de Publicação
2023-05-02
 
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