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Thèse de Doctorat
DOI
10.11606/T.87.2016.tde-26082016-105426
Document
Auteur
Nom complet
Mateus Dalcin Luchese
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2016
Directeur
Jury
Moro, Ana Maria (Président)
Ferreira, Mônica Spadafora
Gonçalves, Viviane Maimoni
Okamoto, Oswaldo Keith
Tavassi, Ana Marisa Chudzinski
Titre en portugais
Desenvolvimento de anti-hTNFα terapêutico.
Mots-clés en portugais
Anticorpo terapêutico
Autoimunidade
Biossimilar/biossuperior
Células CHO
Geração de linhagem celular
TNFα
Resumé en portugais
O objetivo do projeto foi desenvolver linhagens celulares para um anticorpo terapêutico anti-hTNFα e comprovar sua funcionalidade. Os genes anti-hTNFα foram clonados em células CHO para seleção da população estável mista, demonstrando expressão de anticorpo com reconhecimento de hTNFα em estrutura tridimensional. A população de transfectantes de maior produtividade específica foi escolhida para geração de linhagem monoclonal utilizando a tecnologia robótica ClonePix FL. Não houve diferença estatística entre o anti-hTNFα purificado e o produto de referência na cinética de ligação ao TNFα e reconhecimento diferencial por FcγRs em ensaios por SPR O ensaio de atividade funcional mostrou que o anti-TNFα desenvolvido pôde neutralizar a citotoxicidade induzida em células L929 e inibir a expressão de ELAM-1 em HUVEC. Os resultados finais permitiram identificar os três melhores clones, estáveis por 60 gerações. A comparabilidade entre o anti-TNFα desenvolvido e a referência permite admiti-lo como não inferior, um dos requisitos para o desenvolvimento de biossimilar.
Titre en anglais
Development of therapeutic anti-hTNFα.
Mots-clés en anglais
Autoimmunity
Biosimilar/biobetter
Cell line generation
CHO cells
Therapeutic antibody
TNFα
Resumé en anglais
The aim of the project was to develop a therapeutic anti-hTNFα antibody and evaluate its functionality. The anti-hTNFα synthezised genes were cloned into CHO cells and stable pools were selected, producing antibodies able to hTNFα three-dimensional structure recognition. The stable pools displaying higher antibody yields were the source for the generation of monoclonal lineage by ClonePix FL robotic technology. The clones selection proceeded using different criteria as cell density, specific productivity, fed-batch performance, kinetics measured by surface plasmonic resonance, hTNFα binding through ELISA, western-blotting and SPR, FcγRs binding by SPR. Besides, a small number of clones was tested in functional assays by the impairment of cytotoxicity of hTNFα over L929 cells and the inhibition of ELAM-1 expression by HUVEC. The long term stability testing allowed to finally select 3 top clones, not inferior to adalimumab reference by the above criteria.
 
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Date de Libération
2018-08-26
Date de Publication
2016-08-26
 
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