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Master's Dissertation
DOI
10.11606/D.87.2017.tde-16012017-160857
Document
Author
Full name
Karla Yukari Katayama
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2016
Supervisor
Committee
Gonçalves, Viviane Maimoni (President)
Gomez, José Gregorio Cabrera
Lopes, Alexandre Paulo Yague
Title in Portuguese
Avaliação do sistema de estabilização plasmidial toxina-antitoxina para a produção de proteínas recombinantes em Escherichia coli.
Keywords in Portuguese
Escherichia coli
Bioprocessos
Cultivo livre de antibióticos
Estabilidade plasmidial
Proteína recombinante
Toxina-antitoxina
Abstract in Portuguese
Uma abordagem promissora para a obtenção de coquetéis enzimáticos eficientes para a etapa de hidrólise na produção de etanol de 2ª geração é o enriquecimento em termos de atividades que lhes faltam, mas podem ser obtidas através de sistemas heterólogos. O trabalho teve como objetivo avaliar o sistema toxina -antitoxina (TA) para estabilização plasmidial em E. coli na produção de expansina e endoglucanase recombinantes. Os resultados indicaram que o sistema de expressão com estabilização TA é tão eficaz quanto o dependente de antibiótico para estabilização plasmidial. Além disso, mostrou-se mais eficiente pelo fato de não permitir a sobrevivência de células sem o plasmídeo. Estudos indicaram a quantidade mínima de 0,05mM de IPTG para expressão das proteínas nesta linhagem, cerca de 20 vezes menos que a concentração usualmente aplicada no momento da indução. Sendo assim, o sistema de estabilização plasmidial TA mostrou-se uma ótima ferramenta para o desenvolvimento de uma plataforma alternativa para a produção de proteínas recombinantes.
Title in English
Evaluation of plasmidial stabilization system toxin-antitoxin for recombinant proteins production in Escherichia coli.
Keywords in English
Escherichia coli
Antibiotic-free cultivation
Bioprocess
Plasmidial stability
Recombinant protein
Toxin-antitoxin
Abstract in English
A promising approach to obtain efficient enzyme cocktails for the hydrolysis step in the production of 2nd generation ethanol is the enrichment in terms of activities that are lacking, but can be obtained by heterologous systems. The study aimed to evaluate the toxina-antitoxin (TA) system for plasmid stabilization in E. coli in the production of recombinant expansin and endoglucanase. The results indicated that the expression system with TA stabilization is as effective as the antibiotic dependent for plasmid stabilization. Moreover, it proved to be more efficient by not allo wing the survival of cells without the plasmid. Studies have indicated the minimum amount of 0.05 mM IPTG for expression of proteins in this strain, about 20 times less than the concentration usually applied for induction. Thus, the plasmid stabilization TA system proved to be a great tool for the development of an alternative platform for producing recombinant proteins.
 
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Publishing Date
2017-01-16
 
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