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Mémoire de Maîtrise
DOI
10.11606/D.87.2009.tde-11022010-121523
Document
Auteur
Nom complet
Rimenys Junior Carvalho
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2009
Directeur
Jury
Gonçalves, Viviane Maimoni (Président)
Lucarini, Adriana Celia
Pessoa Junior, Adalberto
Titre en portugais
Produção e purificação de um fragmento recombinante da proteína A de superfície do clado 3 (PspA3) de Streptococcus pneumoniae  em Escherichia coli.
Mots-clés en portugais
Escherichia coli
Streptococcus pneumoniae
Alta densidade celular
Clarificação
Cromatografia líquida
Purificação de proteína recombinante
Resumé en portugais
A proteína A de superfície de pneumococo (PspA) é indispensável para a virulência da bactéria e foi escolhida para a elaboração de uma nova vacina conjugada contra S. pneumoniae. Para tanto foi desenvolvido um processo industrial de produção e purificação do fragmento recombinante da PspA clado 3 em E. coli. Cultivos descontínuos alimentados foram estabelecidos com glicose ou glicerol em reator de 5L, obtendo-se 62g/L de células secas e 3g/L de PspA3. As células foram lisadas por homogeneizador contínuo de alta pressão com eficiência de 96,7%. A centrifugação foi definida como etapa de clarificação. A sequência cromatográfica troca aniônica seguida de afinidade por Ni+2 rendeu os melhores resultados de pureza (81%) e recuperação (70%). A cromatografia de troca catiônica foi selecionada como terceira etapa do processo, definindo assim um processo de produção e purificação escalonável que possibilitou a obtenção de PspA3 com alto grau de pureza (90%).
Titre en anglais
Production and purification of a recombinant fragment of pneumococcal surface protein A clade 3 (PspA3) from Streptococcus pneumoniae in Escherichia coli.
Mots-clés en anglais
Escherichia coli
Streptococcus pneumoniae
Clarification
High cell density
Liquid chromatography
Recombinant protein purification
Resumé en anglais
The pneumococcal surface protein A (PspA) is indispensable for virulence of S. pneumoniae and it was the first choice as carrier for a new conjugated vaccine against S.pneumoniae. Hence, the purpose of this work was to develop an industrial production and purification process of a recombinant fragment PspA clade 3 (rfPspA3) in E. coli. Fed-batch cultivations in 5 L bioreactors with defined medium were carried out using glucose or glycerol as carbon sources. It was obtained 62 g/L of dry cell weight and 3 g/L of rfPspA3. Cells were disrupted with 96.7% of efficiency by high pressure continuous homogenizer. Centrifugation was defined for the clarification step. The sequence with Q- followed by IMAC-Sepharose yielded the best purity and recovery of rfPspA3 (81 and 70%, respectively). Cation exchange was chosen for the last chromatography. In conclusion, an industrial production and purification process was developed and rfPspA3 was obtained with high purity (90%).
 
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Date de Publication
2010-02-18
 
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  • CARVALHO, Rimenys Jr., et al. Development of production and purification processes of recombinant fragment of pneumococcal surface protein A in Escherichia coli using different carbon sourcesand chromatography sequences. Applied Microbiology and Biotechnology [online], 2012, vol. 94, p. 683-694. [cited 2012-03-20]. Available from : <http://www.springerlink.com/content/10362p6111485423/>
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