Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.87.2011.tde-10022012-155440
Document
Auteur
Nom complet
Carolina Antunes do Prado Tavares Silva
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
São Paulo, 2011
Directeur
Jury
Marques, Marilis do Valle (Président)
Barbosa, Heloiza Ramos
Gomes, Suely Lopes
Gomez, José Gregorio Cabrera
Spira, Beny
Titre en portugais
Estudo da regulação do gene cspD de Caulobacter crescentus.
Mots-clés en portugais
Caulobacter crescentus
cspD
Genética bacteriana
Glicose
Nitrogênio
Regulação gênica
Resumé en portugais
CspD é uma das quatro proteínas de choque frio de Caulobacter crescentus, sendo maior que as outras CSPs por possuir dois domínios de choque frio, e tem seu papel na célula ainda desconhecido. O objetivo deste trabalho foi identificar e caracterizar os fatores in cis e in trans envolvidos na regulação da expressão do gene cspD em C. crescentus. Neste trabalho foi visto que a expressão de cspD é induzida pela carência de glicose no meio, mas não pela carência de nitrogênio. Esta indução é dependente do sinalizador ppGpp, indicando que ppGpp está envolvido na sinalização de carência de carbono. Um regulador de resposta de um sistema de dois componentes (SpdR) foi identificado como responsável pela indução em fase estacionária, sendo fosforilado pela histidina quinase cognata SpdS. Através de ensaios de EMSA e DNAseI footprinting pudemos verificar que a proteína SpdR se liga em uma sequência repetida invertida no promotor de cspD, e que essa ligação é dependente da fosforilação no resíduo de aspartato na posição 64 da proteína. Foi construído um mutante nulo do gene SpdR e este foi testado quanto à resistência a estresse oxidativo causado por H2O2 e viabilidade em fase estacionária; o mutante não apresentou diferença na resposta em relação à linhagem selvagem.
Titre en anglais
The study of cspD gene regulation in Caulobacter crescentus.
Mots-clés en anglais
Caulobacter crescentus
cspD
Bacterial genetics
Gene regulation
Glucose
Nitrogen
Resumé en anglais
CspD is one of the four cold shock proteins of Caulobacter crescentus being larger than the other ones by possessing two cold shock domains, and its cellular role is still unknown. The aim of this work was to identify and characterize factors in cis and in trans involved in regulation of cspD expression in C. crescentus. In this work we determined that cspD expression is induced by glucose starvation but not by nitrogen starvation. This induction is dependent on the signalling molecule ppGpp, indicating that it is involved in carbon starvation signaling. A response regulator of a two-component system (SpdR) was identified as responsible for stationary phase induction, being phosphorylated by the cognate histidine kinase SpdS. EMSA and DNAseI footprinting assays showed that the SpdR protein binds to an inverted repeat at the cspD promoter, and that this binding is dependent on phosphorylation at the aspartate residue at position 64. A null spdR mutant strain was constructed and its resistance to H2O2 and stationary phase viability were determined, however the mutant showed no difference in response when compared to the wild type.
AVERTISSEMENT - Regarde ce document est soumise à votre acceptation des conditions d'utilisation suivantes:
Ce document est uniquement à des fins privées pour la recherche et l'enseignement. Reproduction à des fins commerciales est interdite. Cette droits couvrent l'ensemble des données sur ce document ainsi que son contenu. Toute utilisation ou de copie de ce document, en totalité ou en partie, doit inclure le nom de l'auteur.
Date de Publication
2012-03-01
AVERTISSEMENT: Le matériau se réfère à des documents provenant de cette thèse ou mémoire. Le contenu de ces documents est la responsabilité de l'auteur de la thèse ou mémoire.
- BALHESTEROS, H., et al. CspC and CspD are essential for Caulobacter crescentus stationary phase survival [doi:10.1007/s00203-010-0602-8]. Archives of Microbiology [online], 2010, vol. 192, p. 747-758.
- SILVA, C. A. P. T., et al. SpdR, a response regulator required for stationary phase induction of Caulobacter crescentus cspD [doi:10.1128/JB.00440-10]. Journal of Bacteriology [online], 2010, vol. 192, p. 5991-6000.
- MAZZON, R. R., et al. Role and regulation of Caulobacter crescentus csp paralogues in response to stress. In Molecular Genetics of Bacteria & Phages, Cold spring Harbor, NY, 2010. Abstracts of Molecular Genetics of Bacteria & Phages., 2010. Abstract.
- MAZZON, R. R., et al. Role and regulation of cold shock proteins in Caulobacter crescentus. In FEMS 2011- 4th Congress of European Microbiologists, Genebra, 2011. Abstracts of FEMS 2011- 4th Congress of European Microbiologists., 2011. Abstract.
- Mazzon, Ricardo R., et al. . RNA metabolism and the cold shock response in Caulobacter. In 4th Caulobacter Meeting, Montreal, 2012. Abstracts of 4th Caulobacter Meeting., 2012. Abstract.
- Mazzon, Ricardo R., et al. RNA metabolism and the cold shock response in Caulobacter. In FEBS RNA workshop, Tavira, Portugal, 2012. Abstracts of . FEBS RNA workshop., 2012. Resumo.
- SILVA, C. A. P. T., et al. Identificação de sinais celulares e fatores de transcrição que regulam a expressão do gene cspD de Caulobacter crescentus. In 54º Congresso Brasileiro de Genética, Salvador, 2008. Resumos do 54º Congresso Brasileiro de Genética., 2008. Resumo.
- SILVA, C. A. P. T., et al. Regulatory mechanisms of cspD induction at stationary phase. In 110th General Meeting of the American Society for Microbiology, San Diego, CA, 2010. Abstracts of 110th General Meeting of the American Society for Microbiology., 2010. Abstract.
- SILVA, C. A. P. T., e MARQUES, MV. Estudo da regulação do gene cspD de Caulobacter crescentus. In 53o Congresso Brasileiro de Genética, Águas de Lindóia, 2007. Resumos do 53o Congresso Brasileiro de Genética., 2007. Resumo.
- SILVA, C. A. P. T., Mazzon, Ricardo R., e MARQUES, MV. Determination of genes regulated by the transcription factor SpdR and its involvement in adaptation to stationary phase in Caulobacter crescentus. In 58o Congresso Brasileiro de Genética, Foz do Iguaçu, 2012. Resumos do 58o Congresso Brasileiro de Genética., 2012. Resumo.
- Orientadora de Carolina A. P. Tavares da Silva, finalista do Premio Jovem Geneticista - Sociedade Brasileira de Genética
- SpdR, a response regulator required for stationary phase induction of Caulobacter crescentus cspD. Trabalho recebeu premio Destaque em Produção Científica - Departamento de Microbiologia ICB-USP