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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.87.2022.tde-06122022-112856
Documento
Autor
Nome completo
Rennan Lopes Olio
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
São Paulo, 2022
Orientador
Banca examinadora
Blazquez, Francisco Javier Hernandez (Presidente)
Aloia, Thiago Pinheiro Arrais
Barbosa, Aliny Antunes
Liberti, Edson Aparecido
Silva, Jose Roberto Machado Cunha da
Visintin, José Antonio
Título em português
Proteínas de comunicação e de junções celulares no epitélio reticular de fetos bovinos, bezerros recém-nascidos e bovinos adultos
Palavras-chave em português
Caderinas
Cateninas
Conexinas
Estereologia
Imuno-histoquímica
Resumo em português
O retículo é um dos pré-estômagos dos ruminantes. Ele se desenvolve somaticamente desde a fase pré-natal até ao fim do período de alimentação do leite. O epitélio reticular e a parede sofrem uma remodelação extensiva durante estas fases. Durante o desmame, o retículo começa a receber estímulos alimentares e finalmente torna-se funcional como órgão digestivo. Este trabalho visou descrever e elucidar alguns processos que contribuem para o remodelamento durante as fases fetais, nos bezerros recém-nascidos e bovinos adultos do epitélio reticular em seu rumo a um estado funcional, principalmente a formação e a caracterização das junções comunicantes 26, 32, 40 e 43. A presença de junções de adesão foi verificada através da identificação de E-cadherin e α- e β-catenins. Como premissa para esta abordagem, estudamos a histologia do órgão durante seu desenvolvimento. Foram utilizadas ferramentas estereológicas para calcular o volume da parede reticular e a densidade relativa do volume das camadas da parede. Foram calculados os índices de proliferação celular e de apoptose utilizando respectivamente marcadores Ki67 e caspase-3 clivados. Estudamos também a presença das conexinas 26, 32, 40 e 43 e proteínas das junções de adesão E-caderina, α e β-cateninas. Os resultados mostram que o volume da parede reticular do adulto é cerca de 37 vezes maior que a do bezerro recém-nascido, contudo, a relação entre o volume da parede em relação ao volume total (volume da parede + volume do lúmen) se mantém constante ao longo do desenvolvimento até a vida adulta. No adulto, a camada muscular compõe quase metade do volume total da parede, em função possivelmente do maior trabalho muscular de contração e motilidade nesta faixa etária. Nos fetos está presente uma estrutura epitelial transitória no interior da qual se desenvolvem as cristas reticulares a qual desaparece após o nascimento. O índice de proliferação pelo Ki67 é maior nos fetos de 110 dias, sendo que o índice de apoptose é maior no bovino adulto. As conexinas estudadas estão sempre presentes no epitélio, seja no citoplasma ou na membrana, mas sua presença na membrana formando junções, isto é, atuando funcionalmente na comunicação celular, varia com a idade e com o estrato epitelial. A Cx43 foi encontrada formando junções na membrana celular em todos os estratos epiteliais e todas as faixas etárias, então nas comparações a seguir sua presença fica subentendida. No estrato basal, principal responsável pela renovação das células do epitélio, as Cxs32 e 40 tornam-se funcionais nos fetos e bezerros, mas não no adulto. Neste último apenas a Cx26 se torna funcional, estando presente no citoplasma em modo de espera nas outras fases. Nos estratos superiores do epitélio, onde as Cxs podem contribuir para a diferenciação, migração e manutenção celular, além da sincronização dos eventos epiteliais, a Cx32 apenas não é funcional nos adultos, e Cx40 não é funcional nos fetos, não contribuindo para a diferenciação e manutenção epitelial nestas fases. A Cx26 forma junções funcionais em todas as idades. Assim, a Cx43, por apresentar-se sempre funcional, parece ter uma função mais genérica nos processos celulares epiteliais, enquanto as outras parecem contribuir mais especificamente e localizadamente, dependendo da faixa etária e do processo biológico que predomina no estrato analisado. Em suma, para a diferenciação, migração e manutenção celular nos estratos superiores a Cx40 é importante para bezerros e adultos e a Cx32 para os fetos e bezerros. As Cxs26 e 43 são importantes em todas as fases etárias nos estratos superiores. A presença de E-caderina, α e βcateninas na membrana revelou que a integridade estrutural do epitélio é reforçada pelas junções de adesão, proporcionando um ambiente propício para a formação de junções comunicantes.
Título em inglês
Communication and cell junction proteins in the reticular epithelium of bovine fetuses, newborn calves and adult bovines
Palavras-chave em inglês
Cadherins
Catenins
Connexins
Immunohistochemistry
Stereology
Resumo em inglês
The reticulum is one of the ruminants pre-stomachs. It develops mainly by somatic growth from the prenatal phase until the end of the milk feeding period. The reticular epithelium and wall undergo extensive remodeling during these phases. During weaning the reticulum begins to receive food stimulus and finally becomes functional as a digestive organ. This work focused in the study of some remodeling processes that contribute to the fetal, newborn calf and adult bovine reticular epithelium adaptation to achieve a functional state, mainly the formation and connexins 26, 32, 40 and 43 characterization of the communicating junctions. The presence of adhesion junctions were verified by the identification of E-cadherin and α- and β-catenins. As a premise for this approach we studied the histology of the organ during its development. Stereological tools were employed to calculate the volume of the reticular wall and the relative volume density of the wall layers. The cell proliferation and apoptosis indexes using Ki67 and cleaved caspase-3 markers respectively were calculated. The volume of the adult reticular wall is 37 times larger than that of the newborn calf; however, the ratio of the wall volume to the total volume (wall volume + lumen volume) of the organ remains constant throughout the development into adulthood. In the adult, the muscle layer constitutes almost half of the total volume of the wall, possibly due to the intense muscle work of contraction and motility in this age group. In fetuses, a transient epithelial structure, inside of which the reticular folds develop, is present. After birth this structure disappears. The rate of proliferation by Ki67 is higher in the 110-day-old fetuses, and the rate of apoptosis is higher in the adult bovine. The connexins are always present in the epithelial cells, either in the cytoplasm or in the membrane, but their presence in the membrane forming junctions functionally active in cell communication varies with age and with the epithelial stratum studied. Cx43 forms functional communication junctions in all epithelial strata and all age groups, so in the following comparisons its presence is always implied. In the basal stratum, which is responsible for the renewal of epithelial cells, Cxs32 and 40 become functional in the fetus and calf, but not in the adult. Cx26 only becomes functional in the basal stratum in adults althought it is present in the cytoplasm in "standby mode" in all other cases. In the upper strata of the epithelium, where Cxs can contribute to cell differentiation, migration and maintenance, and synchronization of epithelial events, Cx32 is not functional only in adults, and Cx40 is not functional in the fetuses, not contributing to epithelial differentiation and maintenance at these age groups. Cx26 forms functional junctions in the upper strata at all ages. Cx43 because it is always functional, seems to have a more generic role in epithelial cellular processes, while the others seem to contribute more specifically and locally, depending on the age group and the biological process that predominates in the stratum analyzed. In summary, for cell differentiation, migration and maintenance in the upper strata Cx40 is important for calves and adults and Cx32 for fetuses and calves. Cxs26 and 43 are important at all age stages in the upper strata. The presence of E-cadherin, α- and β-catenins in the membrane revealed that the structural integrity of the epithelium is enhanced by adhesion junctions, providing a favorable environment for the formation of communicating junctions.
 
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Data de Publicação
2022-12-07
 
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