A prolactina humana é uma proteína hormonal de 23 kDa produzida principalmente pela glândula pituitária, e desempenha várias funções biológicas, como por exemplo: regulação do sistema imunológico, hematopoiese e indução da lactação. No entanto, alterações em seu nível sérico estão diretamente associadas ao desenvolvimento de tumores de mama, próstata e ovário. O objetivo desse estudo foi a produção de hPRL recombinante, contendo 6 histidinas residuais e uma metionina na região N-terminal, que pudesse ser marcada com o radioisótopo I¹³¹ para uso como uma ferramenta diagnóstica de cânceres relacionados a prolactina. Neste estudo, a hPRLhis foi produzida no citoplasma de bactérias E. coli e os corpos de inclusão gerados foram solubilizados sob alta pressão hidrostática. Foi utilizado o plasmídeo pET28a(+) com o cDNA da prolactina humana na cepa BL21(DE3). Os corpos de inclusão foram isolados e lavados. Diversas condições de solubilização foram testadas, incluindo diferentes níveis de pH e agentes redutores. A proteína foi caracterizada e sua atividade biológica foi avaliada usando células BaF/3-LLP. A radiomarcação com ¹³¹I seguiu o método de marcação direta. A prolactina humana (hPRL) foi renaturada com sucesso em condições de alta pressão (2,4 kBar) e pH 10 com incubação por 16 horas em GSSH e GSH. Cerca de 3 mg de prolactina foram obtidos a partir deste processo em um volume total de 5 mL de meio dialisado. A radiomarcação da proteína atingiu um rendimento de até 75% com 100 μCi de Iodo e 10 μg de CLT. Este estudo estabeleceu as condições para produzir hPRLhis no citoplasma bacteriano usando renaturação de alta pressão. A hPRLhis demonstrou alto nível de expressão, pureza e atividade biológica, confirmada em ensaios com células. Além disso, foi radiomarcada para futuras pesquisas com receptores em células tumorais.

Human prolactin is a 23 kDa hormonal protein primarily produced by the pituitary gland, playing various biological roles such as immune system regulation, hematopoiesis, and induction of lactation. However, alterations in its serum levels are directly associated with the development of breast, prostate, and ovarian tumors. The aim of this study was the production of recombinant hPRL, containing 6 residual histidines and one methionine in the N-terminal region, which could be labeled with the radioisotope I131 for use as a diagnostic tool for prolactin-related cancers. In this study, hPRLhis was produced in the cytoplasm of E. coli bacteria, and the generated inclusion bodies were solubilized under high hydrostatic pressure. The pET28a(+) plasmid with human prolactin cDNA in the BL21(DE3) strain was used. The inclusion bodies were isolated and washed. Various solubilization conditions were tested, including different pH levels and reducing agents. The protein was characterized, and its biological activity was evaluated using BaF/3-LLP cells. The 131I radiolabeling followed the direct labeling method. Human prolactin (hPRL) was successfully renatured under high-pressure conditions (2.4 kBar) and pH 10 with 16 hours of incubation in GSSH and GSH. Approximately 3 mg of prolactin were obtained from this process in a total volume of 5 mL of dialysate medium. Protein radiolabeling achieved a yield of up to 75% with 100 μCi of iodine and 10 μg of CLT. This study established the conditions for producing hPRLhis in bacterial cytoplasm using high-pressure renaturation. The hPRLhis demonstrated a high level of expression, purity, and biological activity, confirmed in cell assays. Additionally, it was radiolabeled for future research with receptors on tumor cells.