A gonadotrofina coriônica humana (hCG) é um hormônio glicoproteico de 237 aminoácidos, cuja glicoforma regular apresenta cerca de 37.180 Da, sendo 30 % dessa massa molecular composta por açúcares. Este hormônio é produzido fisiologicamente em grandes quantidades pelas células sinciciotrofoblásticas das vilosidades placentárias durante a gravidez, onde exerce a função de estimular a produção de progesterona e manter o corpo lúteo, nas primeiras 6 semanas da gestação, enquanto a placenta se desenvolve. Também está bem estabelecido que altos níveis de β-hCG estão relacionados com a malignidade tumoral. A hCG assim como os hormônios FSH, LH e TSH, é uma proteína heterodimérica, ou seja, formada por duas subunidades: subunidade α em comum com os outros hormônios citados e subunidade β que confere características específicas para cada hormônio. O objetivo deste trabalho é expressar a gonadotrofina coriônica humana recombinante (r-hCG) em linhagem de células CHO em suspensão, purificar e caracterizar a hCG obtida. Na metodologia empregada para produção deste hormônio, foram construídos dois plasmídeos, um para a expressão da subunidade α e outro para a β. Após a confirmação do sequenciamento, os plasmídeos contendo o cDNA foram empregados para transfectar de forma transiente as células ExpiCHO-S, utilizando lipídeo catiônico (lipofectamina). Na transfecção transiente a proporção dos plasmídeos com as subunidades α e β foram avaliados, a relação 1α:1β foi a que se mostrou mais eficiente durante oito dia de produção. O processo de purificação consistiu de uma troca aniônica seguida por uma exclusão molecular e o hCG obtido apresentou alto grau de pureza. O r-hCG confirmou atividade imunológica por Western Blotting e ELISA. A atividade biológica in vitro foi confirmada por estudos de proliferação celular e citometria de fluxo utilizando células intersticiais de testículo de camundongo mLTC-1 (células de Leydig). Também foram realizadas análises por MALDI-TOF/TOF para determinar a porcentagem de N-glicanos e O-glicanos em cada subunidade do hCG. Os resultados obtidos neste trabalho demonstram que a gonadotrofina coriônica humana recombinante, produzida e purificada em nosso laboratório, atende aos requisitos de autenticidade, pureza e eficácia necessária para sua aplicação, seja para a utilização in vitro ou em ensaios biológicos.

Human chorionic gonadotropin (hCG) is a glycoprotein hormone of 237 amino acids, whose regular glycoform has about 37,180 Da, 30% of which is composed of sugar. This hormone is produced physiologically in large quantities by the synciciotroplastic cells of the placental villi during pregnancy, where it exerts the function of stimulating the production of progesterone and maintaining the corpus luteum in the first 6 weeks of pregnancy, as the placenta develops. It is also well established that high levels of β-hCG are related to tumor malignancy. The hCG as well as the hormones FSH, LH and TSH, is a heterodimeric protein, that is, formed by two subunits: subunit α in common with the other mentioned hormones and subunit β that confers specific characteristics for each hormone. The objective of this work is to express recombinant human chorionic gonadotropin (r-hCG) in a CHO cell line in suspension, purify and characterize the hCG obtained. In the methodology used for the production of this hormone, two plasmids were constructed, one for the expression of the subunit α and another for the β. After confirmation of sequencing, the plasmids containing the cDNA were employed to transiently transfect the cells ExpiCHO-S, using cationic lipid (lipofectamine). In the transient transfection the proportion of plasmids with the subunits α and β were evaluated, the relation 1α:1β was the one that was more efficient during eight days of production. The purification process consisted of an anionic exchange followed by a molecular exclusion and the hCG obtained showed a high degree of purity. The r-hCG confirmed immunological activity by Western Blotting and ELISA. Biological activity in vitro was confirmed by cell proliferation and flow cytometry studies using interstitial cells of mouse testicle mLTC-1 (Leydig cells). Analyses were also performed by MALDI-TOF/TOF to determine the percentage of N-glycans and O-glycans in each subunit of hCG. The results obtained in this work demonstrate that the human chorionic gonadotropin recombinant, produced and purified in our laboratory, meets the requirements of authenticity, purity and efficacy necessary for its application, for in vitro use or for biological testing.