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Disertación de Maestría
DOI
10.11606/D.85.2014.tde-18092014-091537
Documento
Autor
Nombre completo
Flavio Sousa Silva
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2014
Director
Tribunal
Affonso, Regina (Presidente)
Pimenta, Daniel Carvalho
Soares, Carlos Roberto Jorge
Título en portugués
Clonagem, expressão, purificação e caracterização estrutural da região AP-1 da oncoproteína Jun
Palabras clave en portugués
AP-1
câncer
Jun
oncogene
oncoproteína
Resumen en portugués
A proteína jun é um dos principais integrantes do complexo AP-1 e está envolvido nos processos inflamatórios, diferenciação, apoptose e migração celular. Esta proteína pode formar homodímeros e heterodímeros por meio da dimerização que ocorre pelo sítio de sequências de leucinas. Existem evidências de que a proteína jun pode ser inibida pela proteína RPL10 mediante a ligação destas proteínas, no mesmo sítio de sequências de leucinas no núcleo celular, parando a progressão de tumores. O objetivo deste trabalho foi expressar, isolar e caracterizar a região de ligação das sequências de leucinas (região AP-1), para estudos posteriores de ligação com a proteína RPL10. O cDNA para proteína jun foi amplificado por PCR e clonado nos vetores de expressão pET 26b(+), pET 28a-c(+) e p1813 e expressa em E.coli BL21 (DE3). A proteína expressa em vetor pET28_AP1 foi eficientemente purificada pela técnica de cromatografia de afinidade a íons metálicos, por possuir uma sequência (poli)histidina que facilitou a purificação, apresentando um excelente grau de pureza. A identidade da proteína foi confirmada através de análise feita por western blotting e dot blotting e também por analise por espectrometria de massas.
Título en inglés
Cloning, expression, purification and structural evaluation of the region AP-1 oncoprotein Jun
Palabras clave en inglés
AP-1
cancer
Jun
oncogene
oncoprotein
Resumen en inglés
The jun protein is one of the main AP-1 complex members and is involved in the inflammatory process, differentiation, apoptosis and cell migration. The Jun protein may form homodimers and heterodimers by dimerization in the leucines sequences site. There are evidences that jun protein can be inhibited by RPL10 protein through these protein binding in the same leucine sequences site, in the cell nucleus, stopping the tumor progress. The objective of this study was to express, isolate and characterize the binding region of the leucine sequences (AP-1 region) for subsequent binding studies with RPL10 protein. The jun protein cDNA was amplified by PCR and cloned into pET 26b(+), pET 28a-c(+) and p1813 expression vectors, and was expressed in E.coli BL21 (DE3). The protein expressed in pET28_AP1 vector was efficiently purified by the affinity chromatography technique to metal ions because have a (poly)histidine sequence which facilitate the protein purification, showing an excellent high purity. The protein identity was confirmed by western blotting and dot blotting and also by mass spectrometry analysis.
 
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2014SilvaClonagem.pdf (1.26 Mbytes)
Fecha de Publicación
2014-09-22
 
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