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Doctoral Thesis
DOI
Document
Author
Full name
Janaina Baptista Alves
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
São Paulo, 2009
Supervisor
Committee
Nascimento, Nanci do (President)
Dias, Ligia Ely Morganti Ferreira
Marumo, Maria Helena Bellini
Passos, Luiz Augusto Corrêa
Vassao, Ruth Camargo
Title in Portuguese
Resposta imune frente à Bothropstoxina -1 irradiada com 60Co: identificação das principais citocinas envolvidas e a participação de substâncias scavengers
Keywords in Portuguese
Bothropstoxina-1
Citocinas.
Radiação ionizante
Abstract in Portuguese
Considerando os efeitos da radiação gama sobre proteínas e a capacidade do sistema imune de reconhecer macromoléculas modificadas, decidimos pesquisar as principais citocinas envolvidas no padrão de resposta de células Th1 ou Th2 em camundongos (B10.PL, BALB/c ou Knockout-IFN-/-) imunizados com a Bothropstoxina-1 (BTHX-1), uma miotoxina do veneno de Bothrops jararacussu, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Para avaliar prováveis modificações estruturais na molécula da proteína após o processo de irradiação (radiação de 60Co), foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 15% para a BTHX-1, na forma nativa e irradiada, na presença ou não de substâncias scavengers. Os resultados mostraram que a radiação foi capaz de promover alterações na molécula da BTHX-1. Na presença dos scavengers, mesmo após a irradiação da toxina, houve a preservação da banda principal (14 kDa). Com relação aos aspectos imunológicos, foram realizados ensaios de produção e identificação de anticorpos, nos quais, os animais foram imunizados com a BTHX-1, na forma nativa ou irradiada, na presença ou não dos scavengers. Observou-se que a proteína nativa induziu, preferencialmente, uma resposta do tipo Th2, enquanto que a proteína irradiada induziu uma resposta do tipo Th1. A toxina irradiada na presença do tbutanol induziu menor produção de IgG2b, quando comparada a toxina irradiada sem scavengers. Para a quantificação da expressão de citocinas em células esplênicas obtidas dos camundongos, foi realizado o Real-time PCR para a detecção das citocinas IFN-, IL-2, IL- 4 e IL-10. As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 nativa e estimuladas in vitro com a toxina irradiada, apresentaram maior expressão de IFN- e IL-2 (padrão de resposta Th1). As células dos Knockout-IFN-/- imunizados com a BTHX-1 nativa apresentaram maior expressão de IL-4 (padrão de resposta Th2). As células dos camundongos B10.PL e dos BALB/c imunizados com a BTHX-1 + t-butanol apresentaram maior expressão de IL-4 e IL-10, respectivamente. Estes fatos reforçam a participação do OH na modulação da resposta imune contra a toxina irradiada.
Title in English
Immune response against the irradiated Bothropstoxin-1: Identification of main cytokines involved and the participation of scavengers substances
Keywords in English
Bothrospstoxina-1
Citocinas.
Radiação ionizante
Abstract in English
Considering the effects of gamma radiation on proteins and the ability of immune system to recognize modified macromolecules, we have identified the major cytokines involved in immune response of B10.PL, BALB/c and Knockout- IFN-/- mice exposed to native or irradiated bothropstoxin-1 (BTHX-1), in the presence and absence of scavengers substances. In order to evaluate possible molecule structural modifications after being irradiated (60Co gamma rays), bothropstoxin-1 was submitted to SDS-PAGE analyses. Our results indicated that irradiation process has promoted modifications in the BTHX-1 molecule, however, in the presence of scavengers and even after irradiation process, the main band of toxin was preserved (14 kDa). Sera of animals immunized with the native or irradiated toxin, in the presence or not of scavengers, were analyzed in order to quantify specific isotypes. While the native BTHX-1 induced a predominant Th2 response, the irradiated toxin apparently promoted a switch towards a Th1 pattern. The toxin, when irradiated in the presence of t-butanol, induced to a lower production of IgG2b (Th1 response) if compared with the irradiated toxin without scavengers. We also performed a Real-time PCR to quantify the expression of cytokines IFN-, IL-2, IL-4 and IL-10 in spleen cells from mice. The cells of B10.PL and BALB/c mice immunized with native BTHX-1 and in vitro stimulated with irradiated toxin, showed higher expression of IFN- and IL-2 (Th1 response) than the control sample. The cells of Knockout-IFN-/- mice immunized with native BTHX-1 showed higher expression of IL-4 (Th2 response). The cells obtained of B10.PL and BALB/c mice immunized with BTHX-1 + t-butanol, showed higher expression of IL-4 and IL-10, respectively. These facts reinforce the involvement of OH in the modulation of immune response against the irradiated toxin.
 
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Publishing Date
2009-11-19
 
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