O melanoma, um carcinoma cutâneo que afeta os melanócitos produtores de melanina, é notório por sua elevada propensão à metástase, resultando em baixa sobrevida aos pacientes. Terapias convencionais como cirurgia, quimioterapia, radioterapia e imunoterapia, enfrentam desafios devido à resistência tumoral. A radioterapia (RT) e a terapia fotodinâmica (TFD) são modalidades médicas voltadas para a eliminação de tumores primários e sabe-se que associadas com a imunoterapia, podem potencializar a resposta tumoral através de mecanismos de morte celular imunogênica. Esta pesquisa avaliou a morte de células de melanoma murino B16F10 in vitro após aplicação isolada e/ou combinada de RT e TFD. Utilizouse a clorina comercial Photoditazine® (PDZ) como fotossensibilizador (FS) irradiada em 660 nm. Fluências de 2, 6 e 20 J/cm² foram testadas na fase de padronização dos grupos submetidos à TFD, com as concentrações de PDZ de 1, 5, 10 e 20 μg/ml com 1 hora de incubação no escuro e avaliadas pelo ensaio de atividade metabólica 24 horas. Os parâmetros dos grupos experimentais para a associação de RT e TFD foram: dose de RT de 4 Gy, TFD com fluência de 2 J/cm₂ e PDZ na concentração de 5 μg/ml com 1 hora de incubação prévia no escuro. Os intervalos testados entre terapias foram de 1, 4, 24 e 48 horas para as análises da atividade metabólica relativa e os tempos de 24 e 48 horas após a última terapia para a análise da morte celular por citometria de fluxo. Foi observado que a combinação das terapias em intervalos mais longos favoreceu o sinergismo, sendo o grupo RT+TFD com 48 horas de intervalo entre as terapias e análise 24 horas após o mais eficiente, com taxa de morte celular por apoptose de 37,02%. A ordem de aplicação das terapias também demonstrou ser um fator determinante, com a sequência RT+TFD demonstrando maior eficácia na indução de morte celular apoptótica no mesmo protocolo de tempos entre terapias e análise, comparando com a ordem inversa (TFD+RT), que apresentou uma taxa apoptótica de apenas 11,22%. O presente estudo revelou avanços significativos na busca por estratégias terapêuticas eficazes contra o melanoma, destacando a combinação da Radioterapia e Terapia Fotodinâmica como uma abordagem especialmente promissora para o intervalo de 48 horas. O protocolo RT e TFD, com intervalo 48 horas, destaca potencial imunogênico ao induzir importante morte apoptótica, sugerindo estimulação da resposta imunológica. Apesar dos avanços, há necessidade de investigações adicionais para compreender os mecanismos subjacentes, especialmente na relação entre TFD, ciclo celular e resposta imunogênica. A continuidade da pesquisa visa contribuir para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas inovadoras contra o melanoma.

Melanoma, a skin carcinoma that affects melanin-producing melanocytes, is notorious for its high propensity to metastasize, resulting in low patient survival. Conventional therapies such as surgery, chemotherapy, radiotherapy and immunotherapy face challenges due to tumor resistance. Radiotherapy (RT) and photodynamic therapy (PDT) are medical modalities aimed at eliminating primary tumors and it is known that, associated with immunotherapy, they can enhance the tumor response through mechanisms of immunogenic cell death. This research evaluated the death of B16F10 murine melanoma cells in vitro after isolated and/or combined application of RT and PDT. The commercial chlorin Photoditazine® (PDZ) was used as a photosensitizer (FS) irradiated at 660 nm. Fluencies of 2, 6 and 20 J/cm² were tested in the standardization phase of the groups subjected to PDT, with PDZ concentrations of 1, 5, 10 and 20 μg/ml with 1 hour of incubation in the dark and evaluated by the 24-hour metabolic activity. The parameters of the experimental groups for the association of RT and PDT were: RT dose of 4 Gy, PDT with a fluence of 2 J/cm² and PDZ at a concentration of 5 μg/ml with 1 hour of prior incubation in the dark. The intervals tested between therapies were 1, 4, 24 and 48 hours for the analysis of relative metabolic activity and the times of 24 and 48 hours after the last therapy for the analysis of cell death by flow cytometry. It was observed that the combination of therapies at longer intervals favored synergism, with the RT+PDT group with a 48-hour interval between therapies and analysis 24 hours later being the most efficient, with a rate of cell death due to apoptosis of 37.02%. The order of application of therapies also proved to be a determining factor, with the RT+PDT sequence demonstrating greater efficacy in inducing apoptotic cell death in the same protocol of times between therapies and analysis, compared to the reverse order (PDT+RT), which showed an apoptotic rate of only 11.22%. The present study revealed significant advances in the search for effective therapeutic strategies against melanoma, highlighting the combination of Radiotherapy and Photodynamic Therapy as an especially promising approach for the 48-hour interval. The RT and PDT protocol, 48 hours apart, improves immunogenic potential by inducing significant apoptotic death, suggesting stimulation of the immune response. Despite advances, there is a need for additional investigations to understand the underlying mechanisms, especially in the relationship between PDT, cell cycle and immunogenic response. Continuing research aims to contribute to the development of innovative therapeutic strategies against melanoma.