Recombinação genética é um dos principais mecanismos que impulsionam o processo de obtenção de novas proteínas com fins biotecnológicos, podendo-se destacar a utilização de cepas recombinantes de Bacillus subtilis para a produção de vacinas baseadas em subunidades proteicas. Em termos de profilaxia, essa estratégia pode ser aplicada à prevenção contra infecções por Ranavirus, representando uma abordagem inovadora e versátil. As ranaviroses são doenças causadas por vírus do gênero Ranavirus, pertencente à família Iridovidae, que reúne patógenos emergentes capazes de infectar três classes de vertebrados: peixes ósseos, anfíbios e répteis. Surtos de ranavirose associada a estirpes de Frog virus 3 (FV3) podem apresentar alta mortalidade, causando prejuízos consideráveis na ranicultura. Nesse sentido, o presente estudo teve como objetivo a construção de clones recombinantes de Bacillus subtilis por meio da fusão gênica dos genes CotC, associado à proteína do revestimento externo do endósporo de B. subtilis, e MCP (Major Capsid Protein), que codifica a proteína principal do capsídeo, de estirpe brasileira de Ranavirus. Foram desenhados primers específicos para amplificação dos genes CotC e MCP. A amplificação do gene CotC foi obtida de uma cepa parental de Bacillus subtilis. A partir de estirpe de FV3, pertencente ao biobanco do Laboratório de Higiene Zootécnica da FZEA-USP, realizou-se a amplificação do gene MCP. Utilizou-se o produto dessas amplificações para realizar a PCR de fusão, sendo confirmada por sequenciamento nucleotídico. Os produtos da PCR de fusão foram clonados no plasmídeo pDG1662 e inseridos em cepas competentes de Bacillus subtilis, sendo a confirmação dos novos clones, denominados de pDGCMCP, também confirmadas por sequenciamento nucleotídico. A obtenção de cepa recombinante de B. subtilis para MCP de ranavírus, por meio da técnica de spore surface display, utilizada no presente estudo, é etapa essencial no desenvolvimento de vacinas de nova geração contra a ranavirose.

Genetic recombination is one of the key mechanisms driving the process of obtaining new proteins for biotechnological purposes, with the utilization of recombinant strains of Bacillus subtilis standing out for the production of subunit-based vaccines. In terms of prophylaxis, this strategy can be applied to prevent infections by Ranavirus, representing an innovative and versatile approach. Ranavirus diseases are caused by viruses of the Ranavirus genus, belonging to the Iridovidae family, which includes emerging pathogens capable of infecting three classes of vertebrates: bony fishes, amphibians, and reptiles. Outbreaks of ranavirus disease associated with Frog virus 3 (FV3) strains can lead to high mortality, causing significant losses in frog farming. In this context, the present study aimed to construct recombinant clones of Bacillus subtilis by gene fusion of CotC, associated with the outer spore coat protein of B. subtilis, and MCP (Major Capsid Protein), which encodes the major capsid protein, from a Brazilian ranavirus strain. Specific primers were designed for the amplification of the CotC and MCP genes. The CotC gene amplification was obtained from a parental strain of Bacillus subtilis. The MCP gene amplification was performed from an FV3 strain, belonging to the biobank of the Laboratory of Zootechnical Hygiene at FZEA-USP. The products of these amplifications were used to perform fusion PCR, which was confirmed by nucleotide sequencing. The fusion PCR products were cloned into the pDG1662 plasmid and inserted into competent strains of Bacillus subtilis, with confirmation of the new clones, referred to as pDGCMCP, also verified by nucleotide sequencing. The generation of a recombinant strain of B. subtilis for ranavirus MCP, using the spore surface display technique employed in this study, is an essential step in the development of next-generation vaccines against ranavirus diseases.