O tecido adiposo é um órgão metabólico e endócrino, tendo seus adipócitos a capacidade de sintetizar e secretar vesículas extracelulares (VEs), permitindo assim a comunicação intercelular. Os microRNAs (miRNAs), presentes no tecido adiposo e nas VEs circulantes, são capazes de regular a expressão gênica. Esse estudo teve como objetivo avaliar as VEs pequenas no soro de cães obesos, além de: 1) investigar a influência da perda de peso sobre o tamanho e concentração dessas vesículas; 2) avaliar a expressão de três miRNAs alvo em VEs pequenas de cadelas obesas; e 3) analisar marcadores de inflamação e uma possível relação entre o estado inflamatório, as VEs séricas e os miRNAs alvos expressos nas VEs séricas e no tecido adiposo de cadelas obesas. O segundo capítulo, demonstrou que as VEs pequenas foram isoladas a partir do sangue total, por meio de centrifugações e ultracentrifugações seriadas, utilizando o equipamento NanoSight para a determinação do tamanho e concentração dessas VEs pequenas presentes no soro de cães com sobrepeso e obesos, antes e após o programa de perda de peso. A redução do peso corporal e do acúmulo de gordura nesses cães, foi acompanhada pela diminuição do tamanho e da concentração das VEs pequenas, sugerindo assim uma redução da atividade secretora do tecido adiposo dos cães, após 4 meses do programa de perda de peso. No terceiro capítulo foi avaliado o tamanho e a concentração de VEs séricas em cadelas obesas, assim como os miRNAs (miR-132, miR-26b e miR-155) contidos nessas VEs. Os miRNAs foram extraídos das VEs pequenas e analisados pela técnica de PCR em tempo real. Uma análise de componentes principais demonstrou que um grupo de cadelas obesas (obeso com alteração) se agrupavam com relação à concentração de VEs pequenas e concentração sérica de triglicérides. Essas cadelas apresentaram maior concentração sérica de triglicérides, maior concentração de VEs pequenas e maior expressão do miR-132 e miR-26b, sugerindo que com a expansão do tecido adiposo, provocada pela obesidade, está ocorrendo maior produção e liberação de VEs, o que provavelmente está influenciando a comunicação intercelular devido à ação da expressão dos miRNAs contidos nessas VEs pequenas, pois os mesmos parecem estarem envolvidos com metabolismo de lipídios e adipogênese. Finalmente no quarto capítulo, foi avaliado o miR-26b, miR-155 e miR-132 e seus genes alvo (MYCBP, SOCS1 e FOXO3), com o infiltrado de macrófagos e a inflamação no tecido adiposo subcutâneo de cadelas obesas, em comparação com cadelas controle. Os miRNAs foram extraídos das VEs pequenas e do tecido adiposo e analisados pela técnica de PCR em tempo real. A análise da expressão dos genes também foi realizada com a técnica de PCR em tempo real. Nenhuma diferença foi observada em relação aos marcadores de inflamação, infiltrado de macrófagos no tecido adiposo subcutâneo, concentração e tamanho das VEs séricas, expressão dos miRNAs nas VEs e no tecido adiposo subcutâneo e expressão dos genes alvos dos miRNAs no tecido adiposo subcutâneo. Entretanto, observamos que as cadelas obesas apresentaram hipertrofia do tecido adiposo subcutâneo revelando uma alteração na homeostasia desse tecido. Não foram encontradas evidências que comprovassem que o processo inflamatório estava instalado e provavelmente por isso não encontramos alterações nos miRNAs e nos genes alvo avaliados, assim como o número de infiltrado de macrófagos no tecido adiposo subcutâneo. Em suma, esses resultados contribuem para o campo de pesquisa da obesidade canina, visando elucidar o papel das VEs pequenas e de seus miRNAs nessa doença.

Adipose tissue is a metabolic and endocrine organ, and its adipocytes have the ability to synthesize and secrete extracellular vesicles (EVs), thus allowing intercellular communication. MicroRNAs (miRNAs), present in adipose tissue and circulating EVs, are able to regulate gene expression. This study aimed to evaluate the small EVs in the serum of obese dogs, in addition to: 1) investigating the influence of weight loss on the size and concentration of these vesicles; 2) to evaluate the expression of three target miRNAs in small EVs from obese female dogs; and 3) to analyze markers of inflammation and a possible relationship between inflammatory status, serum EVs and target miRNAs expressed in serum EVs and adipose tissue of obese female dogs. The second chapter demonstrated that small EVs were isolated from whole blood, by means of serial centrifugations and ultracentrifugations, using the NanoSight equipment to determine the size and concentration of these small EVs present in the serum of overweight and obese dogs, before and after the weight loss program. The reduction in body weight and fat accumulation in these dogs was accompanied by a decrease in the size and concentration of small EVs, thus suggesting a reduction in the secretory activity of the dogs' adipose tissue after 4 months of the weight loss program. In the third chapter, the size and concentration of serum EVs in obese female dogs was evaluated, as well as the miRNAs (miR-132, miR-26b and miR-155) contained in these EVs. The miRNAs were extracted from the small EVs and analyzed by the real-time PCR technique. A principal component analysis showed that a group of obese female dogs (obese with alteration) clustered together with higher levels of small EVs and serum triglyceride concentrations. These females had higher serum triglycerides, higher concentration of small EVs and higher expression of miR-132 and miR-26b, suggesting that with the expansion of adipose tissue, caused by obesity, greater production and release of EVs is occurring, which is probably influencing intercellular communication due to the action of the expression of miRNAs contained in these small EVs, as they seem to be involved in lipid metabolism and adipogenesis. Finally, in the fourth chapter, miR-26b, miR-155 and miR-132 and their target genes (MYCBP, SOCS1 and FOXO3) were evaluated with macrophage infiltrate and inflammation in the subcutaneous adipose tissue of obese female dogs, compared to control females. MiRNAs were extracted from small EVs and adipose tissue and analyzed by real-time PCR. The analysis of gene expression was also performed using the real-time PCR technique. No differences were observed regarding markers of inflammation, macrophage infiltration in subcutaneous adipose tissue, concentration and size of serum EVs, miRNA expression in EVs and subcutaneous adipose tissue, and expression of miRNA target genes in subcutaneous adipose tissue. However, we observed that the obese female dogs presented hypertrophy of the subcutaneous adipose tissue, revealing an alteration in the homeostasis of this tissue. No evidence was found to prove that the inflammatory process was installed and that is probably why we did not find changes in miRNAs and target genes evaluated, as well as the number of macrophages infiltrated in the subcutaneous adipose tissue. In short, these results contribute to the field of research on canine obesity, aiming to elucidate the role of small EVs and their miRNAs in this disease.