O uso de células-tronco em medicina humana e veterinária vem despertando grande interesse, devido ao elevado potencial apresentado por elas quanto à regeneração tecidual, reparo a órgãos lesionados, bem como no auxílio de tratamentos de patologias crónicas e degenerativas, como consequência destes parâmetros, estudos vem fomentando a aplicação terapeutica dentro da engenharia tecidual. Constituindo a classe de Células-Tronco (CT) encontram-se as células-tronco mesenquimais (CTMs), destacando-se quanto à variedade de fontes de obtenção e viabilidade em cultivo in vitro. As CTM apresentam relevância, na imunomodulação, na regeneração tecidual, e no tratamento de patologias com prognóstico atualmente desfavoráveis. Dentre as fontes de CTM, o tecido adiposo, âmnio e epitélio olfatório, vêm sendo amplamente estudadas. Visando as qualidades apresentadas pelas CTM, bem como potencial terapêutico demonstrado, estudos vem sendo embasados, em necessitades de expansão e armazenamento por perídos prolongados. Os criobancos surgem como uma alternativa para a manutenção da diversidade biológica, por meio da redução do metabolismo celular atraves da criopreservação, a qual permite o uso futuro em terapias, e análises subsequentes. Haja vista a necessidade de recuperação otimizada destas células pós descongelamento, objetivamos avaliar estas três fontes promissoras de CTMs, pós caracterização, em duas fases, estabelecendo assim um estudo comparativo. Na 1a fase, sendo ela o cultivo celular, foi realizado a caracterização das células, enquanto na 2a fase foram avaliadas a viabilidade celular e proliferação in vitro, quando utilizado o protocolo padrão de criopreservação, suplementado com soro fetal bovino e Dimetil-Sulfóxido (DMSO). As células foram criopreservadas e armazenadas pelo período de trinta dias em nitogênio líquido. A proliferação e a viabilidade celular foram analisadas através de curva de crescimento pós descongelamento em 24, 48 e 72 horas, e pelo teste de exclusão, por azul de Tripan e teste de Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (MTT) nos mesmos intervalos. Inicialmente o cultivo das CTM de âmnio, tecido adiposo e epitélio olfatório, de fetos caninos em terço final de gestação (> 42 dias), foi estabelecido, onde as culturas apresentaram morfologia fibroblastóide e aderência ao plástico, heterogenicidade e proliferação, esta demonstrada pela curva de crescimento que se mostrou ascendente nas CTMs oriundas dos três tecidos, tendo as do âmnio atingido o pico na passagem de número 8 ( P8), com proliferação até P13, as do epitélio olfatório apresentado proliferação até P10 com pico em P6 e as provenientes de tecido adiposo com pico em P8 e proliferação até P13. As CTMs dos três tecidos apresentaram potencial á diferenciação multilinhagens, sendo elas a adipogênica, osteogênica e condrogênica, quanto a imunufenotipagem por citometria de fluxo, os três tecidos analisados apresentaram marcação negativa para os marcadores hematopoiéticos CD 34 e CD 45, sendo < que 1% e marcação para o CD 90 e o CD 44, sendo as CTMs do âmnio de 14% e <1%, as do epitélio olfatório com 86,5% e 10% e as do tecido adiposo com 87,8% e 90,8% respectivamente. Na 2a fase as células demostraram pós descongelamento uma viabilidade superior a 70%, tanto nas provenientes do âmnio com 76,07%, o epitélio olfatório com 72,67% e o tecido adiposo com 93,78%. As curvas de crescimento, na análise de proliferação, se mostraram ascendentes nas células dos três tecidos, somente nas células do epitélio olfatório o grupo 1, das células criopreservadas recuperadas (Ccr) obteve maior proliferação quando comparado ao grupo controle, células não criopreservadas (Cnc). Quando analisada a atividade mitocondrial entre o grupo 1 e o grupo controle, houve diferença signicativa (P<0,05), com exceção das células do tecido adiposo no período de 48 e 72 horas que não apresentaram diferenças significativas (P>0,05). Quando comparada a viabilidade pela análise de atividade mitocondrial do grupo1 em relação ao controle, as células provenientes do âmnio se mostraram com porcentagem inferior aos demais tecidos, sendo o epitélio olfatório sem diferenças significativas, porém com aumento da viabilidade no períodos de 48 horas e as células do tecido adiposo as que apresentaram viabilidade superior ao grupo controle bem como ascendência na porcentagem ao longo dos períodos avaliados.

The use of stem cells in human and veterinary medicine has aroused great interest, due to the high potential presented by them in terms of tissue regeneration, repair of injured organs, as well as in aiding the treatment of chronic and degenerative pathologies, as a result of these parameters, studies have been promoting the therapeutic application within tissue engineering. Comprising the class of SC are mesenchymal stem cells (MSCs), standing out in terms of the variety of sources for obtaining and viability in in vitro culture. MSCs are relevant in immunomodulation, tissue regeneration, and in the treatment of pathologies with currently unfavorable prognosis. Among MSC sources, adipose tissue, amnion and olfactory epithelium have been widely studied. Aiming at the qualities presented by MSCs, as well as the demonstrated therapeutic potential, studies have been based on needs for expansion and storage for prolonged periods. Cryobanks emerge as an alternative for maintaining biological diversity, by reducing cell metabolism through cryopreservation, which allows future use in therapies and subsequent analysis. Given the need for optimized recovery of these cells after thawing, this research project aimed to evaluate the three promising sources of MSC, mentioned above, after characterization, in two phases, establishing a comparison. In the 1st phase, which is cell culture, the characterization of the cells was carried out, while in the 2nd phase cell viability and in vitro proliferation were evaluated, when the standard cryopreservation protocol was used, supplemented with fetal bovine serum and Dimethylsulfoxide (DMSO ). The cells were cryopreserved and stored for a period of thirty days in liquid nitrogen. Cell proliferation and viability were analyzed by post-thawing growth curve at twenty-four, forty-eight and seventy-two hours, and by exclusion test, by trypan blue and Thiazolyl Blue Tetrazolium Bromide (MTT) test in the same breaks. Initially, the cultivation of MSCs from amnion, adipose tissue and olfactory epithelium, from canine fetuses in the final third of gestation (> 42 days), was established, where the cultures showed fibroblastoid morphology and adherence to plastic, heterogeneity and proliferation, is demonstrated by the growth curve that showed ascending in MSCs originating from the three tissues, with those from the amnion reaching a peak in passage number 8 (P8), with proliferation up to P13, those from the olfactory epithelium showing proliferation up to P10 with a peak in P6 and those from of adipose tissue with a peak at P8 and proliferation up to P13. The MSCs of the three tissues showed potential for multilineage differentiation, namely adipogenic, osteogenic and chondrogenic, regarding immunophenotyping by flow cytometry, the three tissues analyzed showed negative marking for hematopoietic markers CD 34 and CD 45, with < 1% and marking for CD 90 and CD 44, with amnion MSCs of 14% and <1%, olfactory epithelium MSCs with 86.5% and 10% and adipose tissue MSCs with 87.8% and 90.8 % respectively. In the 2nd phase, the cells showed a viability of over 70% after thawing, both in those originating from the amnion with 76.07%, the olfactory epithelium with 72.67% and the adipose tissue with 93.78%. The growth curves, in the proliferation analysis showed ascending in the cells of the three, only in the cells of the olfactory epithelium, group 1 of recovered cryopreserved cells (Ccr) obtained greater proliferation when compared to the control group, non-cryopreserved cells (Cnc). When analyzing mitochondrial activity between group 1 and the control group, there was a significant difference (P<0.05), with the exception of adipose tissue cells in the 48 and 72 hour period that did not show significant differences (P>0.05 ). When comparing the viability by analyzing the mitochondrial activity of group 1 in relation to the control, the cells from the amnion showed a lower percentage than the other tissues, with the olfactory epithelium without significant differences, but with an increase in viability in periods of 48 hours and the tissue cells. When comparing the viability by analyzing the mitochondrial activity of group 1 in relation to the control, the cells from the amnion showed a lower percentage than the other tissues, with the olfactory epithelium without significant differences, but with an increase in viability in the period of 48 hours and the cells of the fabric adipose the ones that presented viability superior to the control group as well as ascending in the percentage along the evaluated periods.