O maior objetivo da medicina regenerativa é promover a regeneração dos tecidos lesionados utilizando células-tronco. As células-tronco mesenquimais amnióticas (CTMA) têm sido utilizadas em vários estudos, principalmente devido à facilidade de isolamento do tecido amniótico após o nascimento, às suas propriedades imunomoduladoras e angiogênicas, e também devido ao baixo nível de rejeição. Estas células partilham características tanto de células-tronco embrionárias/fetais como adultas, e em especial, são vantajosas, pois não desencadeiam a ação tumorigênica quando injetadas em animais imunocomprometidos. A utilização em larga escala destas células para terapias seria grandemente beneficiada através de estudos que validem a possibilidade de rastreio em futuras terapias. Neste caso, o nosso objetivo consistiu em avaliar as células estaminais amnióticas caninas (CTMAc) em relação à positividade da fluorescência, longevidade e intensidade. Para tal, as CTMAc do Banco de células GDTI/USP foram submetidos a três condições de marcação: dois fluoróforos comerciais (CellTrace CFSE Cell Proliferation kit - CTrace, e CellTracker Green CMFDA - CTracker) e a expressão da proteína fluorescente verde (eGFP) após transdução lentiviral, visando eleger um rastreador mais adequado para ser utilizado em estudos em animais domésticos, o qual apresente persistência adequada nas células, fácil manuseio e análise. Nossos resultados demonstram que todos os grupos apresentam positividade de fluorescência, contudo em padrões diferentes. Especificamente, o CTrace e o CTracker mostraram fluorescência às 4 horas após a inserção, enquanto a visualização do eGFP ocorreu cerca 48 horas após a transdução. A análise por citometria de fluxo mostrou que os grupos CTrace e CTracker apresentaram valores percentuais superiores a 70% de células em D7, enquanto em D20, observou-se a manutenção da porcentagem de fluor6encia destes grupos, nas nossas condições, e a diminuição da fluorescência do grupo eGFP. Nosso estudo demonstrou que os fluoróforos comerciais apresentaram agilidade no início da detecção da fluorescência em cerca de 4 horas e apresentaram uniformidade entre repetições, enquanto o grupo eGFP apresentou maior variação entre repetições e menor porcentagem de fluorescência, sugerindo portanto uma direção promissora para avaliar o caminho das CTMAc no papel da medicina regenerativa sem integração genômica.

The major goal of regenerative medicine is to promote regeneration of injured tissues using stem cells. Amniotic mesenchymal stem cells (AMSCs) have been used in several studies, mainly due to their ease of isolation from amniotic tissue after birth, their immunomodulatory and angiogenic properties, and also due to their low level of rejection. These cells share characteristics of both embryonic/fetal and adult stem cells, and in particular are advantageous in that they do not trigger tumorigenic action when injected into immunocompromised animals. The large-scale use of these cells for therapies would greatly benefit from studies that validate the possibility of screening in future therapies. Here, we aimed to evaluate canine amniotic stem cells (CTMAc) with respect to fluorescence positivity, longevity and intensity. To this end, cTMSCs from the GDTI/USP cell bank were submitted to three labeling conditions: two commercial fluorophores (CellTrace CFSE Cell Proliferation kit- CTrace, and CellTracker Green CMFDA - Ctracker) and the expression of green fluorescent protein (eGFP) after lentiviral transduction, aiming to elect a more adequate tracer to be used in studies in domestic animals, which presents adequate persistence in the cells, easy handling and analysis. Our results demonstrate that all groups show fluorescence positivity, however in different patterns. The analysis by flow cytometry showed that the CTrace and CTracker groups presented percentage values above 70% of cells in D7, while in D20, it was observed the maintenance of the percentage of fluorescence of these groups, in our conditions, and a decrease in fluorescence from the eGFP group. Our study showed that commercial fluorophores showed agility in the onset of fluorescence detection in about 4 hours and showed uniformity between repeatitions, while the eGFP group maintained fluorescence, however presenting a higher variation and diminished fluorescence percentage, and hence, suggesting a promising direction to evaluate the path of CTMAc in the role of regenerative medicine without genomic integration.