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Master's Dissertation
DOI
https://doi.org/10.11606/D.74.2022.tde-15082022-135424
Document
Author
Full name
Waldelucy Karina Bomfim Felix da Silva
Institute/School/College
Knowledge Area
Date of Defense
Published
Pirassununga, 2022
Supervisor
Committee
Sousa, Ricardo Luiz Moro de (President)
Grigoletto, Renan
Montassier, Hélio José
Title in Portuguese
Avaliação imunomicrobiológica de plasma equino coletado por aféreses manual e automatizada
Keywords in Portuguese
Equino
Imunoglobulinas
Plasma
Plasmaférese
Abstract in Portuguese
Com o aumento da utilização de hemocomponentes e hemoderivados em animais, a exemplo do plasma hipermimune em equinos, demandas para obtenção de produtos de alto valor clínico, seguros e com concentrações de anticorpos adequadas e/ou testadas também se intensificaram. Neste contexto, pressupõe-se que o uso de tecnologias mais avançadas pode ser capaz de produzir produtos que assegures um tratamento mais eficaz e um total reestabelecimento da saúde do animal. A aférese automatizada é uma técnica que utiliza equipamentos que centrifugam e separam os componentes por camadas em um sistema fechado. O objetivo da presente investigação foi realizar a avaliação de amostras de plasma equino, coletados de forma manual e automatizada, quanto à quantidade de proteínas totais, imunoglobulina G e qualidade microbiológica. Para tanto, 24 equinos hígidos, com base em parâmetros clínicos, hematológicos e bioquímicos, separados em 2 grupos, foram submetidos à aférese manual ou automatizada. Alíquotas das amostras de plasma dos 2 grupos de animais, conservadas sob refrigeração (8°C) ou congeladas (-20°C e -80°C), foram submetidas à avaliação microbiológica, com identificação por testes bioquímicos, MALDI-TOF, que analisa a estrutura e composição molecular de uma amostra desconhecida e técnicas moleculares (PCR e sequenciamento do gene rDNA 16S), além da quantificação das proteínas totais e de imunoglobulinas G (IgG), através de métodos bioquímicos e eletroforéticos. Nas análises microbiológicas, apenas no método de aférese manual, foi observado crescimento microbiano para 1 amostra de plasma mantida sob refrigeração, sendo identificada como Enterobacter spp.; adicionalmente, 2 outras amostras de plasma, também obtidas pelo método manual, foram positivas ao PCR para rDNA 16S, sendo 1 mantida sob refrigeração e outra com positividade para as alíquotas conservadas nas três temperaturas testadas. Em relação à mensuração protéica, o total de proteínas plasmáticas foi 23% maior pela aférese manual quando comparada à coleta automatizada, considerando amostras de plasma mantidas sob refrigeração; no entanto, não houve diferença entre as técnicas de aférese quando comparados os valores de proteína total para amostras conservadas a -20°C. Para os níveis de IgG, a coleta automatizada foi superior à aférese manual, considerando as amostras mantidas congeladas (-20°C e -80°C). Associando os resultados das análises microbiológicas com a mensuração proteica das amostras plasmáticas testadas, a aférese automatizada mostrou-se mais eficiente e com maior grau de biossegurança quando comparada ao método manual de coleta, principalmente para amostras de plasma conservadas congeladas, visando condições de preservação da qualidade do produto por mais tempo, aumentando sua disponibilidade quando considerados bancos de plasma equino.
Title in English
Immunomicrobiological evaluation of equine plasma collected by manual and automated apheresis
Keywords in English
Equine
Immunoglobulins
Plasma
Plasmapheresis
Abstract in English
With the increased use of blood components and blood products in animals, such as hyperimmune plasma in horses, demands to obtain products of high clinical value, safe and with adequate and/or tested antibody concentrations have also intensified. In this context, it is assumed that the use of more advanced technologies may be able to produce products that ensure a more effective treatment and a total restoration of the animal's health. Automated apheresis is a technique that uses equipment that centrifuges and separates the components by layers in a closed system. The objective of the present investigation was to evaluate equine plasma samples, collected manually and automatically, regarding the amount of total proteins, immunoglobulin G and microbiological quality. Therefore, 24 healthy horses, based on clinical, hematological and biochemical parameters, divided into 2 groups, were submitted to manual or automated apheresis. Aliquots of plasma samples from the 2 groups of animals, stored under refrigeration (8°C) or frozen (-20°C and -80°C), were submitted to microbiological evaluation, with identification by biochemical tests, MALDI-TOF, which analyzes the structure and molecular composition of an unknown sample and molecular techniques (PCR and 16S rDNA gene sequencing), in addition to the quantification of total proteins and immunoglobulins G (IgG), through biochemical and electrophoretic methods. In the microbiological analyses, only in the manual apheresis method, microbial growth was observed for 1 plasma sample kept under refrigeration, being identified as Enterobacter spp.; additionally, 2 other plasma samples, also obtained by the manual method, were positive for PCR for 16S rDNA, being 1 kept under refrigeration and the other with positivity for the aliquots conserved at the three temperatures tested. Regarding protein measurement, total plasma proteins were 23% higher by manual apheresis when compared to automated collection, considering plasma samples kept under refrigeration; however, there was no difference between the apheresis techniques when comparing the total protein values for samples stored at -20°C. For IgG levels, automated collection was superior to manual apheresis, considering samples kept frozen (-20°C and -80°C). By associating the results of microbiological analyzes with the protein measurement of the plasma samples tested, automated apheresis proved to be more efficient and with a higher degree of biosafety when compared to the manual method of collection, especially for frozen preserved plasma samples, aiming at preservation conditions. product quality for longer, increasing its availability when considering equine plasma banks.
 
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Publishing Date
2022-08-19
 
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