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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.74.2020.tde-13042021-135617
Documento
Autor
Nome completo
Letícia Schefer
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Pirassununga, 2020
Orientador
Banca examinadora
Leal, Cláudia Lima Verde (Presidente)
Mingoti, Gisele Zoccal
Watanabe, Yeda Fumie
Título em português
Influência do segundo mensageiro GMPc e suas vias de sinalização no conteúdo lipídico de complexos cumulus-oócitos bovinos maturados in vitro
Palavras-chave em português
PLIN2
Criopreservação.
Lipídios
Lipólise
Peptídeos natriuréticos
Protoporfirina IX
Resumo em português
A produção in vitro de embriões (PIV) é uma biotecnologia amplamente utilizada no Brasil e no mundo. No entanto, ainda existem limitações quanto à sua eficiência em comparação com embriões produzidos in vivo. Em bovinos, uma das dificuldades encontradas é o acúmulo lipídico em blastocistos de PIV que diminui a qualidade embrionária e sua resistência à criopreservação. Buscando alternativas para resolver este problema, é necessário compreender do metabolismo lipídico de complexos cumulus-oócitos bovinos (CCOs). A via AMPc/PKA é a via clássica da lipólise celular, porém, foi demonstrada também a atuação da via do GMPc/PKG no metabolismo lipídico. Assim, como CCOs bovinos expressam componentes dessa via, o objetivo do presente estudo foi investigar o envolvimento do GMPc no metabolismo lipídico de CCOs bovinos através da manipulação farmacológica da mesma. No primeiro estudo, divido em três experimentos, foi avaliado o conteúdo lipídico de oócitos e células do cumulus (CC) sob influência de estimuladores de síntese do GMPc (NPPB e Protoporfirina IX) e sob a influência da inibição da PKG (KT5823). Observamos que apenas o NPPB foi capaz de reduzir o conteúdo lipídico dos oócitos e nas células do cumulus. Além disso, avaliamos a expressão de genes relacionados ao metabolismo lipídico (PLIN2), dos receptores de peptídeos natriuréticos (NPRs) e foi realizada a quantificação dos níveis intracelulares de GMPc nos mesmos tratamentos anteriormente utilizados, porém não houve diferença significativa em nenhum dos parâmetros avaliados. Durante todos os experimentos realizados, foram avaliadas as taxas de maturação nuclear dos oócitos e nenhum dos tratamentos utilizados afetou a maturação oocitária. No segundo estudo, dividido em dois experimentos, foram utilizados os mesmos estimuladores de síntese de GMPc (NPPB e Protoporfirina IX) na MIV, sendo avaliados os perfis lipídicos de oócitos e embriões produzidos in vitro. Os perfis de oócitos e embriões bovinos não foram alterados pela manipulação da via GMPc. As taxas de clivagem e blastocisto com NPPB não foram afetadas, porém, no grupo tratado com Protoporfirina IX, as taxas foram zeradas. Em conclusão, sugerimos o envolvimento da via GMPc no metabolismo lipídico de CCOs bovinos e que a manipulação dessa via pode reduzir o conteúdo lipídico dos oócitos sem afetar o perfil lipídico dos oócitos e embriões resultantes.
Título em inglês
Influence of the second messenger cGMP and its signaling pathways on the lipid content of in vitro matured bovine cumulus-oocyte complexes
Palavras-chave em inglês
PLIN2
Cryopreservation
Lipids
Lipolysis
Natriuretic peptides
Protoporphyrin IX
Resumo em inglês
in vitro embryo production (IVP) is a biotechnology widely used in Brazil and worldwide. However, there are still limitations regarding its efficiency compared to embryos produced in vivo. In cattle, one of the difficulties encountered is the accumulation of lipids in IVP blastocysts, which reduces embryonic quality and its resistance to cryopreservation. Looking for alternatives to solve this problem, it is necessary to understand the lipid metabolism of bovine cumulus-oocyte complexes (COCs). The cAMP/PKA pathway is the classic cell lipolysis pathway, but the role of the cGMP/PKG pathway in lipid metabolism has also been demonstrated. Thus, as bovine COCs express components of this pathway, the objective of the present study was to investigate the involvement of cGMP in the lipid metabolism of bovine COCs through its pharmacological manipulation. In the first study, divided into three experiments, the lipid content of oocytes and cumulus cells (CC) was evaluated under the influence of cGMP synthesis stimulators (NPPB and Protoporphyrin IX) and under the influence of PKG inhibition (KT5823). We observed that only NPPB was able to reduce the lipid content of oocytes and cumulus cells. In addition, we evaluated the expression of genes related to lipid metabolism (PLIN2), natriuretic peptide receptors (NPRs) and the quantification of intracellular cGMP levels was performed in the same treatments, however, there were no significant differences in any of the parameters evaluated . During all the experiments carried out, nuclear oocyte maturation rates were evaluated and none of the treatments used affected oocyte maturation. In the second study, divided into two experiments, the same cGMP synthesis stimulators (NPPB and Protoporphyrin IX) were used during IVM, and the lipid profiles of oocytes and embryos produced in vitro were evaluated. The lipid profiles of bovine oocytes and embryos were not altered by manipulation of the cGMP pathway. Cleavage and blastocyst rates were not affected by NPPB, but in the group treated with Protoporphyrin IX, no development was observed. In conclusion, we suggest the involvement of the cGMP pathway in the lipid metabolism of bovine CCOs and that manipulation of this pathway can reduce the lipid content in oocytes without affecting the lipid profile of these of oocytes and resulting embryos.
 
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ME10225945COR.pdf (1.47 Mbytes)
Data de Publicação
2021-04-13
 
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