O lambari (Astyanax lacustris) é um peixe caraciforme de pequeno porte que vem ganhando grande destaque na aquicultura nacional sendo também muito utilizado como modelo em pesquisas, uma vez que possui altas taxas de crescimento, fácil reprodução e rápida maturação sexual. A crescente importância deste peixe faz com que seja cada vez mais necessário desenvolver alternativas para o controle de enfermidades que os acometem, como é o caso da ictiofitiríase, causada pelo protozoário ciliado Ichthyophthirius multifiliis, um parasita que atinge praticamente qualquer espécie de peixe de água doce causando importantes perdas para a indústria de pescados. Apesar disso, não existem tratamentos eficazes para o controle dessa patogenia em produções de larga escala, o que torna essencial a adoção de estratégias preventivas. Dessa forma, o objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da imunização de A. lacustris com vacina gênica composta pelo antígeno de imobilização IAG52A de I. multifiliis em conjunto com a citocina IL-8 obtida de lambaris como adjuvante molecular. As sequências do IAG52A e da IL-8 foram clonadas no vetor de expressão pcDNA 3.1. A análise da transcrição do gene IAG52A de I. multifiliis em lambaris imunizados com o plasmídeo pcDNA3.1-IAG52A indicou a produção de mRNA na musculatura dos peixes vacinados, e que havia potencial de expressão dessa proteína nos animais. Posteriormente, os peixes foram divididos em cinco grupos, vacinados com PBS, com pcDNA 3.1 sem inserto, com o pcDNA 3.1-IAG52A, com o pcDNA 3.1-IL-8 e com uma associação do pcDNA 3.1-IAG52A + pcDNA 3.1-IL-8. Todos os grupos receberam uma dose de reforço 14 dias após a primeira imunização. Dos peixes vacinados foram coletadas amostras de baço e do rim anterior para a análise da expressão das citocinas inflamatórias, IL-1, IL-8, TNFα e IFNγ. Os resultados demonstraram que a vacina foi capaz de gerar um aumento da IL1-β no baço nas primeiras 6 h pós segunda dose e após 14 dias. A expressão de IL-8 no baço e no rim não apresentou diferenças significativas do grupo controle. A análise da TNFα no rim dos animais vacinados demonstrou expressão superior dos grupos vacinados com IAG52A, IAG52-A+IL-8 e MOCK em relação ao controle após 14 dias que pode estar relacionada a componentes do próprio plasmídeo. Para a IFN-γ, as diferenças de expressão entre os grupos não permitiram conclusões concretas acerca do mecanismo de regulação da expressão destas nos animais vacinados. A análise histológica foi realizada para visualizar a migração de células inflamatórias para a região de aplicação da vacina, demonstrando que não houve diferença na concentração de leucócitos no período de 12 e 24 h após a vacinação. Entretanto, após 14 dias, os grupos injetados com IAG e com IAG+IL-8, apresentaram uma densidade maior de leucócitos nos sítios de aplicação quando comparados ao controle. Os dados obtidos indicam que que a vacina utilizada é transcrita sugerindo que pode estimular parâmetros de resposta imune inata através da expressão de citocinas e da migração leucocitária.

The lambari (Astyanax lacustris) is a small characiform fish that has been gaining prominence in national aquaculture and is also widely used as a model in research since it has high growth rates, easy reproduction, and rapid sexual maturation. The growing importance of this fish makes it increasingly necessary to develop alternatives for the control of diseases that affect them, such as ichthyophytyriasis, caused by the ciliated protozoan Ichthyophthirius multifiliis, a parasite that affects practically any species of freshwater fish. causing significant losses to the fish industry. Despite this, there are no effective treatments to control this pathogen in large-scale production, making adopting preventive strategies essential. Thus, the objective of the present work was to evaluate the effect of immunization of A. lacustris with a gene vaccine composed of the immobilization antigen IAG52A of I. multifiliis together with the cytokine IL-8 obtained from lambaris as a molecular adjuvant. The IAG52A and IL-8 sequences were cloned into the pcDNA 3.1 expression vector. Transcription analysis of the IAG52A gene of I. multifiliis in lambaris immunized with the pcDNA3.1-IAG52A plasmid indicated mRNA production in the vaccinated fish's musculature, and that there was potential for expression of this protein in the animals. Subsequently, the fish were divided into five groups, vaccinated with PBS, with pcDNA 3.1 without insert, with pcDNA 3.1-IAG52A, with pcDNA 3.1-IL-8, and with an association of pcDNA 3.1-IAG52A + pcDNA 3.1-IL- 8. All groups received a booster dose 14 days after the first immunization. Spleen and anterior kidney samples were collected from vaccinated fish to analyze the expression of inflammatory cytokines, IL-1, IL-8, TNFα and, IFNγ. The results showed that the vaccine was able to generate an increase in IL1-β in the spleen in the first 6 h after the second dose and after 14 days. IL-8 expression in the spleen and kidney did not show significant differences from the control group. The analysis of TNFα in the kidney of vaccinated animals showed higher expression of the groups vaccinated with IAG52A, IAG52-A+IL-8 and MOCK compared to the control after 14 days, which may be related to components of the plasmid itself. For IFN-γ, the differences in expression between the groups did not allow concrete conclusions about the mechanism of regulation of their expression in vaccinated animals. Histological analysis was performed to visualize the migration of inflammatory cells to the vaccine application region, demonstrating that there was no difference in leukocyte concentration between 12 and 24 h after vaccination. However, after 14 days, the groups injected with IAG and with IAG+IL-8, presented a higher density of leukocytes in the application sites when compared to the control. The data obtained indicate that the vaccine used is transcribed, suggesting that it can stimulate innate immune response parameters through the expression of cytokines and leukocyte migration.