Mixosporídeos são cnidários cosmopolitas e endoparasitas obrigatórios, com cerca de 2.600 espécies descritas. Possuem um complexo ciclo biológico, caracterizado pela transmissão via esporos multicelulares. Podem ser encontrados em vários tecidos e órgãos de vertebrados, principalmente peixes, mas também em anfíbios, répteis, aves e mamíferos. Esses cnidários também são encontrados em invertebrados aquáticos (oligoquetas), estes atuam como hospedeiro definitivo e os vertebrados atuam como hospedeiros intermediário. Uma variada gama de espécies de mixosporídeos são importantes patógenos de peixes, e apresentam grande impacto econômico na aquicultura e na pesca extrativista, no mundo inteiro. No Brasil são descritas aproximadamente 140 espécies de mixosporídeos e algumas dessas em peixes nativos e de sistemas de criação têm se mostrado patogênicas ou com grande potencial para causar danos em seus hospedeiros, ocasionando impactos e prejuízos econômicos tanto na pesca quanto na aquicultura. Os métodos tradicionais de detecção desses parasitas em peixes e oligoquetas necessitam da captura dos hospedeiros, para a obtenção de cistos ou esporos e normalmente estes métodos demandam muito trabalho envolvendo uma série de etapas, e a necessidade de vários equipamentos. Ainda quando não há a presença visível de infecções ou altas taxas de mortalidades de peixes, a detecção dos parasitas pode ser dificultada. Este estudo teve como objetivo otimizar métodos para detectar a presença de DNA de mixosporídeos através da análise do SSrDNA em amostras ambientais através das técnicas de PCR Convencional (cPCR) e PCR em Tempo Real (qPCR), oferecendo métodos simples de detecção precoce, e que podem avaliar e quantificar a presença de mixosporídeos na água de pisciculturas. Foram coletadas 48 amostras de água de duas pisciculturas do interior do estado de São Paulo. As amostras contendo cada um 1 litro de água foram armazenadas em gelo e conduzidas para o laboratório. Posteriormente, as amostras foram processadas seguindo as etapas: filtração à vácuo em membrana de nitrato de celulose; extração de DNA de esporos reditos na membrana; Reação de cPCR e qPCR com primers descritos na literatura, e primers construídos para esse estudo. A metodologia utilizada para a filtração e extração de DNA mostraram-se eficientes para a obtenção de DNA de esporos de mixosporídeos presentes na água e as concentrações de DNA variaram entre 1,6 ng a 53,2 ng. A cPCR foi capaz de detectar até 0,1 x 10_-3 ng de DNA e identificar 24 amostras positivas (50%). A qPCR detectou concentrações de até 0,1 x 10_-4 ng de DNA de mixosporideos e 40 amostras coletadas (83%) foram positivas. Os resultados desse trabalho, mostraram que a qPCR é mais sensível que a cPCR sendo capaz de detectar a presença do SSrDNA de mixosporídeos em um número maior de amostras.

Myxosporeans are cnidarians, mandatory cosmopotian, endoparasites, with about 2.600 species listed. They have a complex biological cycle, characterized by transmission via multicellular spores. Myxosporeans infect a variety of tissues and vertebrate organs, mainly fish, but also amphibians, reptiles, birds and mammals. Annelids serve as the invertebrate hosts in the complex life cycle of myxosporeans. The latter are invertebrate hosts. A wide range of myxosporeans species are important fish pathogens, and present a great economic impact in aquaculture and commercial fishing worldwide. In Brazil, 140 myxosporeans species were registered. Some listed in native fish and fish farming have been shown to be pathogenic or in great potential to cause damage to their hosts, causing impacts and economic losses in both fishing and aquaculture. The current methods of detecting these parasites require the capture of hosts to obtain samples, which is toilful and time consuming. Even when there is no visible infection or high fish mortality rates, the detection of parasites can be challenging. This present study aimed to optimize methods to detect the presence of myxosporeans DNA in environmental samples using conventional PCR (cPCR) and Real-Time PCR (qPCR) techniques, offering simple methods of early detection, which can evaluate and quantify the presence of myxosporeans in fish farms water. 48 water samples were collected from two fish farms in the countryside of São Paulo state. They were stored in ice and transported to the laboratory. After, the samples were processed according to the following steps: filtration, vacuum on cellulose nitrate membrane; DNA extraction from the membrane; Reaction of Conventional PCR and Real-Time PCR with primers described in the literature, and primers built for this study. The methodology used for DNA filtration and extraction proved to be efficient for obtaining DNA from myxosporeans present in water and the DNA concentrations varied from 1.6 ng to 53,2 ng. The cPCR was able to detect up to 0.1 x 10-3 ng of DNA and identify 24 positive samples (50%). The qPCR detected concentrations up to 0,1 x 10-4 ng of myxosporeans DNA and 40 samples collected (83%) were positive. The results of this work showing to be more sensitive qPCR than cPCR able to detect the presence of myxosporid SSrDNA in a larger number of sample.