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Tese de Doutorado
DOI
https://doi.org/10.11606/T.64.2021.tde-19092022-110747
Documento
Autor
Nome completo
Maria Soledad Moura Soares Fernández Acevedo
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Piracicaba, 2021
Orientador
Banca examinadora
Rocha, Fabio Rodrigo Piovezani (Presidente)
Bottoli, Carla Beatriz Grespan
Dias, Ana Cristi Basile
Masini, Jorge Cesar
Título em português
Estratégias para pré-concentração e separação por cromatografia por injeção sequencial
Palavras-chave em português
Bioanalítica
Cromatografia bidimensional
Cromatografia por injeção sequencial
Pré-concentração on column
Separação cromatográfica à baixa pressão
Resumo em português
A cromatografia por injeção sequencial (SIC) expandiu a aplicabilidade de sistemas de análises em fluxo com separações à baixa pressão, permitindo a análise de diversos analitos em uma mesma amostra, explorando os benefícios da automação. Visando ampliar a aplicabilidade do SIC e explorar as suas características, foram desenvolvidas três estratégias analíticas. A primeira proposta foi o desenvolvimento de um procedimento para pré-concentração de compostos fenólicos (resveratrol, quercetina e canferol) diretamente na coluna cromatográfica. Respostas lineares foram observadas entre 0,1 e 1,00 mg L-1 (r > 0,997), com limites de detecção (LOD) estimados em 0,2, 8 e 9 g L-1 e fatores de enriquecimento de 84, 35 e 29, para resveratrol, quercetina e canferol, respectivamente. O procedimento foi aplicado à determinação de compostos fenólicos em cervejas, após clean up das amostras por uma adaptação da metodologia QuEChERS, com recuperações entre 84 e 110%. Uma estratégia pioneira para cromatografia bidimensional ampliou a capacidade de separação do SIC, explorando colunas cromatográficas com diferentes características químicas. A aplicabilidade foi demonstrada pela separação das aminas biogênicas histamina, tiramina, feniletilamina e triptamina empregando, na primeira dimensão cromatográfica, uma coluna monolítica de sílica funcionalizada com cianopropil, com fase móvel completamente aquosa e, na segunda dimensão cromatográfica, uma coluna particulada do tipo C18, com fase móvel 7% v/v de acetonitrila em solução de ácido fosfórico pH 2,5. Respostas lineares foram obtidas entre 10 e 50 mg L-1, para histamina, tiramina e feniletilamina e entre 10 e 40 mg L-1 para triptamina (r > 0,997), com LOD estimados em 3, 8, 2 e 0,3 mg L-1, para histamina, tiramina, feniletilamina e triptamina, respectivamente. Foi obtida boa precisão (CV de 3,0%, n = 12) e resolução de 1,72 foi alcançada entre os picos mais próximos (tiramina e feniletilamina). A terceira proposta objetivou a separação de aminas biogênicas com eluição por gradiente de concentração gerado pela dispersão de uma alíquota de acetonitrila em água. Histamina, tiramina, feniletilamina e triptamina foram utilizadas como analitos modelo, empregando uma coluna particulada com sílica funcionalizada com C18. O tempo de análise foi de 2,5 min, com resolução de 1,6 entre os picos da feniletilamina e triptamina, e LOD de 1,6, 1,7, 1,3 e 0,4 mg L-1, para histamina, tiramina, feniletilamina e triptamina, respectivamente. Respostas lineares foram obtidas entre 5 e 30 mg L-1 (r > 0,991), com CV (n=10) dos tempos de retenção e área de pico entre 0,08% - 0,84% e 1,5 2,5%, respectivamente
Título em inglês
Strategies for preconcentration and separation by sequential injection chromatography
Palavras-chave em inglês
Bioanalysis
Low-pressure chromatography
Multidimensional chromatography
On column preconcentration
Sequential injection chromatography
Resumo em inglês
Sequential injection chromatography (SIC) has expanded the applicability of low-pressure separations in flow analysis, allowing the determinations of several analytes in the same sample. Aiming at further expansion of the applicability of SIC and a better exploitation of its analytical characteristics, three analytical strategies were developed. The former involved a novel procedure for in-line concentration of phenolic compounds (resveratrol, quercetin, and kaempferol) directly on the chromatographic column. Linear responses were observed within 0.1 and 1.00 mg L-1 (r > 0.997), with detection limits (LOD) estimated as 0.2, 8, and 9 g L-1 and enrichment factors of 84, 35, and 29, for resveratrol, quercetin, and kaempferol, respectively. The procedure was applied to the analysis of beers, after sample clean up by an adaptation of the QuEChERS method, with recoveries between 84 and 110%. The second strategy involved the pioneer exploitation of two-dimensional chromatography aiming at to expand the separation capacity of SIC by using chromatographic columns with different chemical characteristics. The feasibility of the innovation was demonstrated by separation of the biogenic amines histamine, tyramine, phenylethylamine, and tryptamine, using a cyanopropyl monolithic column with a completely aqueous mobile phase as the first chromatographic dimension and a superficially porous column (C18) with 7% v/v of acetonitrile in phosphoric acid solution pH 2.5 as the second one. Linear responses were obtained in the 10 - 50 mg L-1 range for histamine, tyramine and phenylethylamine and in the 10 - 40 mg L-1 range for tryptamine (r > 0.997), with LOD of 3, 8, 2, and 0.3 mg L-1, respectively. Precise results (CV of 3.0%, n = 12) and resolution of 1.72 between the nearest peaks (tyramine and phenylethylamine) were achieved. The third strategy referred to an advanced separation of biogenic amines with gradient elution attained by dispersing an acetonitrile aliquot in water. Histamine, tyramine, phenylethylamine, and tryptamine were selected as model analytes, and a particulate column with C18 functionalized silica was employed. The analysis time was 2.5 min, the resolution of the phenylethylamine and tryptamine peaks was 1.6, and LOD values for histamine, tyramine, phenylethylamine, and tryptamine were 1.6, 1.7, 1.3, and 0.4 mg L-1, respectively. Linear responses ranged from 5 to 30 mg L-1 (r > 0.991) and CV (n = 10) of retention times and peak area were within 0.08% - 0.84% and 1.5 - 2.5%, respectively
 
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Data de Publicação
2022-10-24
 
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