O carcinoma espinocelular da cavidade oral (CECO) é um dos tipos de câncer com prognóstico desfavorável. A cisplatina é um dos quimioterápicos pós-operatórios mais utilizados nesta neoplasia. No entanto, a baixa resposta e a recidiva devido à aquisição de quimiorresistência, tem sido associada com a presença das células-tronco tumorais (CTT), visto que há aumento dessa subpopulação após o tratamento. A autofagia tem sido associada à resistência a terapias antitumorais e estudada como um alvo terapêutico promissor no tratamento de câncer. Nesse contexto, é necessário buscar novas estratégias terapêuticas mais eficazes, com menos efeitos colaterais e capazes de eliminar as CTT. O objetivo desse estudo foi investigar os efeitos antitumorais de novas combinações terapêuticas com foco na autofagia frente a resistência à cisplatina e as CTT em CECO. Selecionamos três fármacos: Paclitaxel, Cloroquina e FTY720 para testes in vitro de viabilidade usando quatro linhagens celulares de CECO; Cal27 e SCC9 selvagens (WT) e Cal27 e SCC9 resistentes à cisplatina (CisR), e posteriormente, foi determinado o índice de interação de drogas (CID) entre os fármacos nas linhagens CisR. As linhagens CisR apresentaram queda drástica da viabilidade celular quando expostas às combinações testadas e os fármacos tiveram sinergismo significativo (CID<0.7). Sendo assim, três combinações com maior sinergismo para cada linhagem resistente foram escolhidas para os testes de clonalidade, formação de esferas (cultura 3D), e análise de proteínas envolvidas em autofagia e em vias de sinalização de proliferação e sobrevivência celular por Western blotting, assim como a expressão de genes relacionados à quimiorresistência por PCR quantitativo em tempo real. Nossos resultados indicaram que a aquisição de quimiorresistência à cisplatina está associada com aumento de autofagia, onde a inibição do mecanismo autofágico reverteu a resistência e permitiu elevada eficiência de resposta aos fármacos combinados. Houve perda total da capacidade clonogênica, diminuição significativa de células com caraterísticas de CTT, assim como redução de vias associadas a carcinogênese, proliferação e sobrevivência (SET, c-Myc, Stat3, NFkB, Akt). Portanto, as combinações de fármacos propostas neste trabalho sugerem a autofagia como um alvo estratégico para evitar a quimiorresistência a cisplatina e eliminar as CTT no câncer oral.

Squamous cell carcinoma of the oral cavity (OSCC) is one of the types of cancer with an unfavourable prognosis. Cisplatin is one of the most used postoperative chemotherapy agents for this neoplasm. However, the low response and relapse due to the acquisition of chemoresistance have been associated with the presence of tumour stem cells (TCC), since there is an increase in this subpopulation after treatment. Autophagy has been linked to resistance to antitumor therapies and studied as a promising therapeutic target in cancer treatment. In this context, it is necessary to seek new, more effective therapeutic strategies, with fewer side effects and capable of eliminating CTT. This study aimed to investigate the antitumor effects of new therapeutic combinations focusing on autophagy against cisplatin resistance and CTT in CECO. We selected three drugs: Paclitaxel, Chloroquine and FTY720 for in vitro viability tests using four CECO cell lines wild type Cal27 and SCC9 (WT) and cisplatin-resistant Cal27 and SCC9 (CisR), and subsequently, the interaction index of drugs (CID) among the drugs in the CisR strains. The CisR strains showed a drastic drop in cell viability when exposed to the tested combinations and the drugs had significant synergism (CID<0.7). Thus, three combinations with greater synergism for each resistant strain were chosen for clonality tests, sphere formation (3D culture), and analysis of proteins involved in autophagy and cell proliferation and survival signalling pathways by Western blotting, as well as the expression of genes related to chemoresistance by quantitative real-time PCR. Our results indicated that the acquisition of cisplatin chemoresistance is associated with an increase in autophagy, where the inhibition of the autophagic mechanism reversed the resistance and allowed a high efficiency of response to the combined drugs. There was a total loss of clonogenic capacity, a significant decrease in cells with CTT characteristics, as well as a reduction in pathways associated with carcinogenesis, proliferation and survival (SET, c-Myc, Stat3, NFkB, Akt). Therefore, the drug combinations proposed in this work suggest autophagy as a strategic target to avoid cisplatin chemoresistance and eliminate CTT in oral cancer.