O aumento nos níveis da proteína ribonucleoproteína heterogênea K (hnRNP K) foi descrito em diversos tipos de câncer e associado ao pior prognóstico, incluindo o câncer oral. Esta proteína liga-se ao RNA e DNA e participa de diversas interações regulatórias proteína-proteína, sendo encontrada no núcleo, citoplasma e mitocôndrias. A proteína hnRNP K é alvo de diferentes modificações pós-traducionais como metilação e fosforilação, regulando sua interação com outras proteínas e sua localização subcelular, permitindo que ela participe de diferentes mecanismos de regulação gênica. O objetivo deste trabalho foi estudar a potencial função de hnRNP K no reparo de erro de pareamento de bases por meio de sua relação com a proteína YB1, importante para este sistema de reparo na mitocôndria. As linhagens celulares utilizadas foram de queratinócitos orais não tumorais com superexpressão ou redução da hnRNP K expostas ou não a tratamentos com metotrexato (que causam danos oxidativos no DNA) e U0126 (um inibidor de fosforilação capaz de inibir a fosforilação de hnRNP K e seu consequente transporte para o citoplasma). Por meio de análises de frações proteicas mitocondriais, nucleares e total por Western blot, e por imunofluorescência, evidenciou-se que o acúmulo de hnRNP K no núcleo leva ao aumento dos níveis de p53 e de YB1 na mitocôndria. Ensaios de mobilidade de mudança eletroforética de oligômeros contendo na sequência erro de pareamento de bases e inserções com os extratos proteicos mitocondriais e nucleares mostraram que as células superexpressando hnRNP K reduzem o reparo de erro de pareamento de bases mitocondrial. Por outro lado, ensaios de cometa mostraram que a superexpressão de hnRNP K em células expostas a danos oxidativos por metotrexato possuem um efeito protetor nas células. Desta maneira, a proteína hnRNP K possui um efeito negativo neste sistema de reparo do DNA mitocondrial, porém favorece a resistência à morte celular e regula indiretamente o sistema de reparo de erro de pareamento de bases, podendo também atuar por outros mecanismos, tais como a reprogramação metabólica e redução do estresse oxidativo.

Higher levels of the heterogeneous ribonucleoprotein K (hnRNP K) has been described in different types of cancer and is associated with worse a prognosis, including in oral cancers. This protein binds itself to RNA and DNA, participating in different protein-protein regulatory activities, and can be found in the nucleus, cytoplasm and mitochondria. HnRNP K is the target for different post-translational changes, such as methylation and phosphorylation, which regulate its interactions with other proteins and its subcellular localization, allowing hnRNP K to participate in different genomic regulation mechanisms. The aim of this study was to study hnRNP K's potential role in the mismatch repair system by its interaction with YB1, an important protein for the mitochondrial mismatch repair. We used normal oral keratinocytes cell lines (NOK-SI) with overexpression or lower levels of hnRNP K with or without treatment of methotrexate (which causes oxidating DNA damages) and U0126 (a phosphorylation inhibitor capable of inhibiting hnRNP K's phosphorylation and its subsequent translocation to the cytoplasm). Protein fraction analysis of mitochondrial, nucleus and whole cell lysates through western blot and immunofluorescence have shown that higher hnRNP K levels in the nucleus increases the levels of p53, as well as YB1 in the mitochondria. Electrophoretic mobility shift assays of oligomer sequences containing a mismatch or insertion with mitochondrial and nuclear protein fractions show hnRNP K overexpressing cells decreasing the mismatch repair in the mitochondria. On the other hand, comet assays show that hnRNP K overexpression in cells exposed to oxidative damages caused by methotrexate has a protective effect in the cells. HnRNP K, therefore, has a negative effect in the mismatch repair system of mitochondrial DNA, but favors cell death resistance, indirectly regulating the mismatch repair system, which can lead to hnRNP K protecting the cell by other means, such as metabolic reprogramming and lower levels of oxidating stress.