O tratamento de feridas crônicas requer o uso de curativos que sejam capazes de proteger mecanicamente a ferida, de contribuir para o processo de cicatrização e de evitar ou dirimir qualquer contaminação microbiana. A terapia fotodinâmica (TFD) é uma forma de tratamento que envolve a aplicação de agentes fotossensibilizantes e luz e tem sido investigada para o tratamento de feridas devido a sua capacidade em modular a resposta imune e a seu efeito antimicrobiano. O objetivo deste trabalho foi desenvolver um curativo na forma de filme capaz de modular a liberação de substâncias sensíveis a TFD visando a cicatrização de feridas. Para tanto, foram desenvolvidos filmes a base de fibroína da seda funcionalizados com um doador de óxido nítrico (NO), a S-nitrosoglutationa (GSNO), contendo ácido 5-aminolevulinico (5-ALA) incorporado. O 5-ALA e um pro-fotossensibilizador que induz a produção de protoporfirina IX in vivo e vem sendo explorado na TFD tópica de feridas. A GSNO e capaz de liberar o NO na presença de estímulo luminoso, podendo o NO auxiliar na proliferação celular quando presente em baixas concentrações. E por fim, a fibroina da seda e um biopolimero natural usada como plataforma para o crescimento de células. Uma dispersão de fibroína foi preparada a partir de casulos de Bombyx mori e funcionalizada com GSNO (Fibroína-GSNO). O conjugado Fibroína-GSNO foi caracterizado por técnicas espectroscópicas e com ele foram preparados filmes contendo 5-ALA. Os filmes foram caracterizados por técnicas espectroscópicas, análise térmica, propriedades mecânicas e de intumecimento, cinéticas de liberação do 5-ALA e do NO na presença de irradiação em comprimentos de onda específicos, cito e fototoxicidade e expressão do mediador de cicatrização dérmica TGF-β. Modificações na intensidade e no deslocamento de bandas do espectro no infravermelho da Fibroína-GSNO em relação ao espectro da fibroína, além do aparecimento de uma nova banda em 2.09 ppm no espectro de ressonância magnética nuclear da Fibroína-GSNO, características de uma ligação éster, indicaram a funcionalização da fibroína com a GSNO. Os filmes desenvolvidos a base de Fibroína-GSNO apresentaram-se homogêneos e transparentes, com superfície densa e ausência de poros, adequada resistência mecânica, baixa capacidade de intumescimento e permeáveis ao vapor de água, com transmissão de vapor em torno de 2400 g/m2. A irradiação dos filmes a 377 nm e 447 nm resultou em liberação controlada do NO, sendo que a irradiação a 377 nm liberou aproximadamente 20 vezes mais NO do que a irradiação no visível. A liberação de 5-ALA dos filmes foi independente do estímulo luminoso e sustentada por 72 h, com velocidade de liberação de aproximadamente 25 µg/cm2/h1/2. Estudos in vitro em cultura de fibroblastos indicaram que os filmes não foram citotóxicos e nem fototóxicos quando irradiados a 470 nm e dose de luz de 3 J/cm2. Os filmes contendo 5-ALA foram capazes de aumentar em aproximadamente três vezes a expressão de TGF-β em relação ao controle sem 5-ALA, tanto na presença como na ausência de luz. Desta forma, os filmes de Fibroína-GSNO contendo 5-ALA desenvolvidos são promissores curativos para feridas.

Chronic wound treatments require the use of dressings which are capable of mechanically protecting the wound, contributing to the healing process and avoiding any microbial contamination. Photodynamic therapy (PDT) is a kind of treatment involving application of photosensitizing agents and light. PDT has been investigated for wounds treatment due to its modulatory capacity of immune response and its antimicrobial effect. The objective of this work was to develop a film dressing able to modulate the release of substances PDT-responsives aiming the healing of wounds. For this purpose, silk-fibroin films functionalized with a nitric oxide donor (NO), S-nitrosoglutathione (GSNO), containing 5-aminolevulinic acid (5-ALA) incorporated were developed. 5-ALA is a pro-photosensitizer that induces a production of protoporphyrin IX in vivo and has been explored on topical PDT of wounds. GSNO is able of releasing NO under light stimulus and low concentrations of NO released can aid in cell proliferation. Finally, silk fibroin is a natural biopolymer used as basis for cell growth. Fibroin dispersion was prepared from Bombyx cocoons and functionalized with GSNO (Fibroin-GSNO). Fibroin-GSNO conjugate was characterized by spectroscopic techniques and used to formulate films containing 5-ALA. Films were characterized by spectroscopic techniques, thermal analysis, mechanical and hydration properties, release kinetics of 5-ALA and NO in the presence of irradiation at specific wavelengths, cytotoxicity and phototoxicity and expression of the dermal healing mediator TGF-β. Modifications in intensity and displacement of bands of Fibroin-GSNO infrared spectrum in relation to fibroin spectrum, in addition to the emergence of a new band in 2.09 ppm in Fibroin-GSNO nuclear magnetic resonance spectrum, characteristic of an ester bond, indicated the functionalization of fibroin with GSNO. Fibroin-GSNO films were homogeneous and transparent, with dense surface and absence of pores, mechanical resistance, low swelling capacity and permeable to water vapor, with a water vapor transmission rate of about 2400 g/m2. Irradiation of the films at 377 nm and 447 nm resulted in controlled release of NO, with irradiation at 377 nm inducing the release of almost 20-fold more NO than the irradiation in the visible region. The release of 5-ALA from the films was independent of the light stimulus and sustained for 72 h, with release rate of approximately 25 µg/cm2/h1/2. In vitro studies on fibroblast culture indicated that the films were neither cytotoxic nor phototoxic when irradiated at 470 nm and light dose of 3 J/cm2. The films containing 5-ALA were able to increase 3-fold the expression of TGF-β relative to the control without 5-ALA, both in the presence and absence of light. Therefore, Fibroin-GSNO films containing 5-ALA are a promising strategy for wound healing.