Estima-se que cerca de sete milhões de pessoas estejam infectadas com Trypanosoma cruzi em todo o mundo, inclusive residentes de países não endêmicos. O benznidazol é o fármaco de escolha para tratamento da doença, mas ele causa severos efeitos colaterais e apresentam baixa eficácia em pacientes com cardiomiopatia chagásica crônica avançada. Nas últimas décadas, milhares de substâncias têm sido estudadas na prospecção de novas substâncias ativas contra Trypanosoma cruzi. Nesse contexto, os corantes fenotiazínicos representam uma classe de substâncias de alto potencial terapêutico, especialmente o fenotiazínico azul de metileno, que tem sido usado o tratamento da malária e estudado contra outros protozoários, como Leishmania sp e Trypanosoma cruzi. Portanto, o objetivo desse trabalho foi determinar o potencial tripanocida de corantes fenotiazínicos, combinados ou não ao benznidazol, em protocolos para tratamento in vitro e in vivo de infecção por Trypanosoma cruzi. Os corantes comerciais (azul de metileno (MB), novo azul de metileno (NMB), azul de toluidina (TBO) e 1,9 dimetil azul de metileno (DMMB) e quatro sintéticos não comerciais (DO15, DO16, DO37 e DO43), foram avaliados, combinados ou não ao benznidazol, em protocolos in vitro. No estudo in vitro, a atividade tóxica das substâncias foi determinada em células de mamíferos e o ensaio tripanocida, avaliado contra as formas amastigotas da cepa Tulahuen. As substâncias MB e DMMB, combinados ou não ao BZ, foram selecionados para o estudo em animais experimentalmente infectados (cepa Y) durante a fase aguda da infecção. O efeito biológico do tratamento foi monitorado pela parasitemia no sangue de camundongos, seguido de quantificação do DNA parasitário no tecido cardíaco pelo método de qPCR e contagem de ninhos de amastigotas em cortes histológicos. Outras ferramentas de estudo incluíram: determinação de parâmetros bioquímicos (ALT e AST) e análise imunomoduladora em timo e baço dos camundongos. NMB e DMMB inibiram as formas amastigotas de Trypanosoma cruzi em concentrações menores que 100nM. Esse efeito foi potencializado e sinérgico quando ambos foram combinados a TBO nos estudos in vitro. Em contrapartida, animais experimentalmente infectados demonstraram um aumento da parasitemia após tratamento com MB, BZ+DMMB, MB+DMMB. Na maioria dos métodos avaliados, esses grupos demostram maior carga parasitária quando comparado com o controle infectado, principalmente BZ+DMMB e MB+DMMB. O aumento da carga parasitária pelo tratamento com MB+DMMB parece estar ligado ao maior recrutamento de células específicas do sistema imune para o local de infecção ou bloqueio de funções importantes do sistema imunológico, uma vez que a atrofia do timo, aumento das populações T duplo negativas e T CD8+ estão aumentadas nesse grupo. Da mesma maneira células dendríticas e macrófagos que são células especializadas na fagocitose e reconhecimento de antígenos foram significativamente aumentadas após tratamento com MB+DMMB. Embora os resultados desse trabalho sugerem uma baixa atividade dos fenotiazínicos no estudo in vivo, o potencial in vitro deve despertar estudos futuros sobre o entendimento da falha terapêutica in vivo, principalmente porque MB é um medicamento utilizado em seres humanos, apresenta baixo custo e toxidade. Estudos futuros devem ser encorajados para contribuir no desenvolvimento de terapias alternativas para tratamento da doença de Chagas.

About seven million people are infected with Trypanosoma cruzi worldwide, including residents of non-endemic countries. Benznidazole is a therapy choice for treatment of the disease, but it causes severe side effects and have low efficacy in patients with advanced chronic Chagas cardiomyopathy. In the last decades, thousands of substances have been studied in the prospection of new active substances against Trypanosoma cruzi. In this context, phenothiazine dyes represent a class of substances of high therapeutic potential, especially the methylene blue phenothiazine, which has been used to treat malaria and investigated against other parasites such as Leishmania sp and Trypanosoma cruzi. Therefore, the aim of this work was to determine the trypanocidal potential of phenothiazine dyes, combined or not with benznidazole, from in vitro and in vivo treatment protocols on Trypanosoma cruzi infection. Commercial dyes (methylene blue (MB), new methylene blue (NMB), toluidine blue (TBO) and 1.9-dimethyl methylene blue (DMMB) and four non-commercial dyes (DO15, DO16, DO37 and DO43). The toxicity of the substances was determined in mammalian cells and trypanocidal assay was performed against the amastigote forms of the Tulahuen strain. MB and DMMB, combined or not BZ, were selected for the study in experimentally infected animals (strain Y) during the acute phase of infection. The biological effect of the treatment was monitored by parasitemia in the blood of mice, followed by quantification of the parasitic DNA in the cardiac tissue by the qPCR method. Other tools included: determination of biochemical parameters (ALT and AST) and immunomodulatory analysis in thymus and spleen of mice. NMB and DMMB inhibited the amastigote forms of Trypanosoma cruzi at concentrations less than 100 nM. This effect was potentiated and synergistic when both were combined in the in vitro studies. In contrast, experimentally infected animals demonstrated an increase in parasitaemia after treatment with MB, BZ + DMMB, MB+DMMB. In most of the evaluated methods, these groups show higher parasitic load when compared to the infected control, mainly BZ+DMMB and MB + DMMB. The increase in parasite burden by treatment with MB+DMMB appears to be linked to recruitment of specific cells of the immune system to infection site or it may block some important functions of the immune system, since thymic atrophy, increased T double populations negative and CD8+ T are increased in this group. In the same way dendritic cells and macrophages that are specialized cells in phagocytosis and antigen recognition were significantly increased after treatment with MB+DMMB. Although the results of this work suggest a low activity of the phenothiazines in the in vivo study, the in vitro potential should awaken future studies on the understanding of the therapeutic failure in vivo, mainly because MB is a medicine used in humans, presents low cost and toxicity. Future studies should be encouraged to contribute to the development of alternative therapies for the treatment of Chagas' disease.