A galectina-3 (Gal-3) é uma proteína multifuncional presente em diversos processos fisiológicos e patológicos incluindo desenvolvimento tumoral, metástase e insuficiência cardíaca. Uma das ferramentas disponíveis para o estudo dessas proteínas é a técnica Phage Display, que proporciona a expressão de uma biblioteca combinatória de fragmentos de anticorpo expressa na superfície de bacteriófagos e a seleção de unidades capazes de se ligar a um determinado alvo. Essa última etapa, ou seja, a seleção de unidades é denominada de panning e apresenta limitações como possibilidade de selecionar alvos inespecíficos, dificuldade de utilizar proteínas alvos de baixa massa molecular e rotina excessivamente trabalhosa e longa. Assim, neste trabalho foi utilizada a eletroforese capilar (EC), uma técnica de separação compatível com análise de proteínas e vírus, no desenvolvimento de um método para seleção de fragmentos de anticorpos específicos para a Gal-3 no contexto da tecnologia de Phage Display. Inicialmente, amostras de Gal-3 foram expressas em culturas de E. Coli e purificadas em coluna de afinidade sepharose-alfa-lactose. Em seguida as proteínas foram analisadas por EC e as seguintes condições foram escolhidas: eletrólito de corrida Tris-HCl 50mM pH 6,8, Tensão 20kV, 18ºC, aditivo trietilamina 4mM, concentração de Gal-3 50 µg/mL, 1psi de injeção por 10 segundos, capilar de 30cm com revestimento interno PVA. Em seguida, a amostras de Gal-3 foram incubadas com a biblioteca de fragmentos de anticorpos fusionados a bacteriófagos e separados em EC com as mesmas condições, utilizando os mesmos princípios do panning clássico, porém com a inclusão de uma técnica analítica de separação. Após a incubação com a biblioteca, foi observada com 8 minutos de análise a migração do complexo [Gal-3+Fago], que foi coletado e amplificado com sucesso. Apesar de mais estudos serem necessários para comprovar a possibilidade da técnica analítica de EC ser utilizada como uma ferramenta alternativa ao panning tradicional, esse trabalho revelou um potencial promissor dessa prática, que pelas características da EC poderá contribuir com seletividade e rapidez.

Galectin-3 (gal-3) is a multifunctional protein involved in several physiological and pathological pathways, such as a tumor development, metastasis and heart failure. One way of studying this molecules is through the Phage Display technique, which enables the yield of a antibody fragment combinatory library expressed on the surface of bacteriophages and select the ones able to bind with a pre-determined target. This selection presents some limitations, such as low viability on small targets, unspecific selections time consuming routines. This study developed an alternative galectin-3 antibody fragment binding selection method using capillary electrophoresis. Initially Gal-3 samples were expressed via E.Coli cultures and purified via sepharose-alfa-lactose afinity column. Then the proteins were analyzed using the CE system and the following electrophoretic conditions were selected: back ground electrolyte Tris-HCL 50 mM, pH 6,8, voltage 20kV, temperature 18ºC, additive trietihylamine 4mM, 1psi de injection for 10 seconds, 30 cm length capillary with PVA coating. Afterwards, the Gal-3 samples were incubated with the phage displayed antibodies library and analyzed via CE, using the same conditions, and exploring the viability as an alternative selection method. The [Gal-3+Phage] complex presented an 8 minutes migration time and was successfully collected and amplified. Although more studies are needed to validate CE as an alternative selection technique, these results indicate a promising potential to enhance selectivity and rapidity due to CE characteristics.