O topiramato (TPM) é um medicamento utilizado no tratamento de crises epilépticas generalizadas e focais e no tratamento adjunto da epilepsia refratária. Devido à alta variabilidade interindividual, às interações medicamentosas e aos efeitos adversos apresentados durante a administração do TPM, a monitorização terapêutica nos pacientes que fazem uso deste medicamento é necessária para ajuste de dose individual e evitar esses efeitos. Assim, o objetivo deste trabalho foi a avaliação da técnica de microextração em fase líquida com fibras ocas (HF-LPME) para análise do TPM em amostras de plasma e saliva de pacientes epilépticos. A análise do TPM foi realizada por cromatografia líquida acoplada a espectrometria de massas, com coluna Ascentis Express C18 (2,7 µm, 10 cm X 4,6 mm) equipada com coluna de guarda Ascentis Express C 18 (2,7 µm, 3 mm X 4,6 mm), temperatura de 40°C, vazão de 0,25 mL.min-1 e fase móvel composta por acetonitrila:água (80:20, v/v). Nestas condições o TPM e o padrão interno (PI), prednisona foram analisados em menos de 6 minutos. Foi utilizada a ionização por electrospray (ESI) no modo negativo e as transições dos ions foram: m/z 338→78 e m/z 338→96 para o TPM e m/z 357→327 e m/z 357→123 para a prednisona. A HF-LPME foi avaliada no modo de 3 fases, usando 200 µL de plasma ou 700 µL de saliva, 3,5 mL de solução fosfato de sódio 20 mmol L-1 pH 6,0 como fase doadora. O solvente utilizado para impregnar a fibra foi o 1-octanol. Como fase aceptora foram utilizados 80 µL de solução de hidróxido de amônio pH 12,0 para ambas matrizes biológicas. Em uma velocidade de extração de 1000 rpm e tempos de extração de 30 min e 40 min respectivamente, para amostras de plasma e saliva. As características de desempenho analítico para ambos os métodos foram avaliadas, utilizando como guias o EMA (2011) e a ANVISA (2012) sendo obtida linearidade na faixa de concentração plasmática e salivar de 1- 30 µg mL-1 e limite inferior de quantificação (LIQ) de 1 µg mL-1. Os ensaios de precisão e exatidão apresentaram valores abaixo de 15%, de acordo com os guias oficiais. Além disso, os métodos foram seletivos, não apresentaram efeito residual e as amostras foram estáveis. Os valores de eficiência de extração foram de 38,3 e 21,1% para amostras de plasma e saliva, respectivamente. Os métodos validados foram aplicados com sucesso em amostras de pacientes epilépticos em tratamento com o TPM. A HF- LPME apresentou vantagens, mostrando ser uma técnica promissora para análise de matrizes complexas, com reduzido consumo de solvente orgânico e possibilidade de automação.

Topiramate (TPM) is an antiepileptic drug that can be used in the treatment of newonset and refractory epilepsy. Due to its high interindividual variability, drug interactions and the adverse effects presented during the TPM administration, therapeutic drug monitoring is very important to dose adjustment and to avoid toxicity effects. Thus, the goal of this study was to develop and validate the hollow fiber liquid-phase microextraction (HF-LPME) to analyze TPM in plasma and saliva samples of epileptic patients. TPM analysis was performed using high performance liquid cromatrography coupled to mass spectrometry (LC-MS/MS) with a Ascentis Express C18 (2,7µm, 10 cm X 4,6 mm) column equipped with a guard column filter of the same packing material, temperature of 40°C, flow rate of 0.25 mL min-1 and mobile phase consisting of acetonitrile:water (80:20, v/v). Under final conditions, TPM and the internal standard (IS) prednisone were analyzed in less than 6 minutes. Electrospray ionization (ESI) was used in the negative mode and the ion transitions were: m / z 338 → 78 and m / z 338 → 96 for topiramate and m / z 357 → 96 and m / z 357 → 123 for prednisone. HF-LPME was evaluated in the three phase mode using 200 µL of plasma or 700 µL of saliva, 3.5 mL of sodium phosphate solution 20 mmol L-1 pH 6.0, into an organic phase composed of 1-octanol immobilized in the pores of the hollow fiber, and further into an acceptor phase (of ammonium hydroxide solution pH 12.0) placed in the lumen of the fiber for both biological matrices. At an stirring rate of 1000 rpm and extraction times of 30 min and 40 min, respectively, for plasma and saliva samples. Under the optimized conditions using as guides EMA (2011) and ANVISA (2012), both methods were linear over the plasmatic and salivary concentration range of 1.0-30.0 µg mL-1 and the lower limit of quantification (LLOQ) was 1.0 µg mL-1. Both methods showed good precision, accuracy (below 15%), selectivity to TPM, with no carryover and the samples were stable under the studied conditions. The extraction efficiency were 38.3 and 21.1% to plasma and saliva samples, respectively. The validated methods were successfully applied for the quantification of TPM in samples of epileptic patients. The HF-LPME showed advantages for being more suitable to analysis of complex matrices using small amount of organic solvent, and also can be automated.