o presente estudo avaliou 2002 amostras de sangue de cães provenientes de áreas endêmicas (região oeste do Estado de São Paulo) e de áreas não endêmicas (município de São Paulo) para leishmaniose visceral americana (LVA), com o objetivo de otimizar os testes sorológicos preconizados pelo Programa de Controle de LVA em inquéritos sorológicos caninos, e produzidos por Biomanguinhos (Reação de Imunofluorescência Indireta / RIFI-BM e Ensaio Imunoenzimático ELISA / ELlSA-BM. Para tal, as amostras de sangue foram agrupadas em três bancos de dados: Banco (A) constituído por 97 amostras de sangue assim caracterizadas: 51 amostras com exames parasitológico e sorológico positivo sintomatologia definida como assintomática (2); oligossintomática (18) e sintomática (31); além destas, 46 amostras de sangue sorológicamente negativas das quais 26 tinham exames parasitológico e sorológico negativos e 20 somente com exame sorológico negativo; Banco (B) composto por 174 amostras pareadas de soro e sangue colhidas em papel-filtro das quais 167 com diagnóstico clínico, sorológico e parasitológico positivos; Banco (C) constituído de 1831 amostras de sangue colhidas em papel-filtro, provenientes de 3 inquéritos sorológicos caninos realizados nos municípios de Rubiácea, Piacatú e Luiziânia. A RIFI foi realizada quantitativamente nas diluições 1/20, 1/40, 1/80 e 1/160 e a leitura foi expressa por critério de cruzes sendo atribuído porcentagens para cada leitura assim definidas: A) zero (0%), B) + (25%), C) ++ (50%), D) +++ (75%) e E) ++++ (100%). Os resultados dos dois testes RIFI-BM e ELlSA-BM foram comparados com os resultados obtidos nos mesmos testes mas utilizando antígeno específico de Leishmania chagasi e permitiram concluir que a RIFI com antígeno específico (RIFI-CH) foi capaz de separar todos os verdadeiros negativos dos verdadeiros positivos. Foi possível ainda observar que a eficiência da RIFI-BM variou de 60% a 76%. Quando se compararam os resultados da RIFI-BM com soro e com papel-filtro, na diluição 1/40, como preconiza o PCLVA, observou se que para a RIFI com papel-filtro o melhor ponto de corte ficou definido como 30%, ou seja, acima de 1+ (25%) e para o soro o ponto de corte ficou estabelecido em 45%. Portanto o novo parâmetro para o ponto de corte da RIFI-BM deve ser a diluição 1/40 com leituras de 2+ (50%), ou então 1/80 o que seguramente diminuiria o número de falsos positivos. Da comparação de resultados da RIFI-BM com os do ELlSA-BM observou-se uma discordância de 23% entre os dois testes, ou seja o ELlSA-BM deixou de diagnosticar 23% dos resultados positivos em relação aos observados com a RIFI-BM. O ELISA BioManguinhos forneceu mais resultados falsos positivos com o ponto de corte estabelecido pelo Kit, quando comparado com o novo ponto de corte proposto neste estudo, que foi calculado a partir de controles negativos de eluatos. Quando o ELISA foi avaliado com o novo ponto de corte nas 3 populações caninas dos inquéritos sorológicos (Rubiácea, Piacatú e Luiziânia) a soroprevalência diminuiu em quase 50% quando comparado com o mesmo teste com ponto de corte preconizado por Biomanguinhos. Os resultados do estudo demonstraram a urgência de se implementar iniciativas para o aprimoramento de novos testes sorológicos com antígenos específicos que sejam capazes de identificar e separar as diferentes fases da doença.

In this study we analyzed 2002 blood samples of dogs living in endemic and non endemic areas for visceral leishmaniasis (VL). The purpose of the study was to optimize the serologic tests produced by the Biomanguinhos (Immunofluorescence test /IFT-BM and enzyme-linked immunosorbent assay / ELlSA-BM) and used by the Visceral Leishmaniasis Control Program (VLCP). The blood samples were grouped in three different sets: set (A) with 97 blood samples: 51 with clinical sign and symptoms from which 2 were asymptomatic, 18 oligossyntomatic and 31 symptomatic (serology and parasitological also examined); 46 negative serological from which 26 were also examined by parasitological methods.; set (B) with 174 samples comprising serum and blood collected on filter paper with clinical, serological and parasitological diagnostic; set (C) with 1831 samples of blood collected in filter paper from dog serological survey carried out in Rubiácea, Piacatú and Luiziânia. The quantitative analyze of the RIFI were made by the dilution 1/20, 1/40, 1/80 and 1/160 and the results expressed by crosses giving the percentage to each class such as: 0% = 0; 25% = +; 50% = ++; 75% = +++; 100% = ++++. The results were compared with those obtained by the same tests using the L.chagasi specific antigen and showed that such (RIFI-CH) differentiated the true negative from the true positive. It was also showed the RIFI-BM efficiency varied from 60% to 76%. Comparing the RIFI-BM results under the dilution of 1/40, as indicated by the VLCP, with the samples of the serum and the filter paper the best cut off for the last is 30% or over 1 + (25%) and for the serum 2+ (50%) or 1/80 that for sure will down the false positive number. Comparing the results of the RIFI-BM and ELlSA-BM there is discordance around 23% between the two tests that means the ELlSA-BM does not diagnostic 23% of the positive results observed by the RIFI. The ELISA Biomanguinhos resulted in more false positive tests with the cut off suggested by the Kit when compared with the cut off obtained in the present study that was estimated from of negative controls of eluted samples. When the ELISA was estimated with the new cut off in the survey of dogs (Rubiácea, Piacatú and Luiziânia) the seroprevalence down almost 50%. The results of the study show the urgency in make the tests more efficient to identify and to differentiate the clinical stages.