Dissertação de Mestrado

O Ferro Lábil (LIP) representa uma reserva celular ubíqua, dinâmica e rigidamente regulada de Fe(II), homeostaticamente controlada para ser utilizada na metalação seletiva de novas apo-proteínas de ferro. Apesar da sua significância no metabolismo do ferro, a identidade e as propriedades de ligação do LIP ainda permanecem incertas. Assumindo que o LIP se associa a um constituinte celular C na forma de um complexo (CLIP) e utilizando o quelante de LIP Calceína (CA), desenvolvemos anteriormente um modelo de ligação que foi testado experimentalmente em diversos modelos celulares. Os resultados obtidos para a concentração total de C (C_T) e para a constante de afinidade termodinâmica (K_d) de CLIP, calculados a partir do modelo, confrontam a hipótese existente de que o LIP está associado à glutationa (GSH/GS) na forma do complexo [FeGS(H₂O)₅]. O presente estudo investigou essa hipótese de maneira mais detalhada em macrófagos (RAW 264.7), um modelo celular relevante para o metabolismo do ferro, que apresenta altos níveis de LIP. Os resultados mostraram que a diminuição da concentração de GSH em mais de dez vezes não alterou as concentrações de C_T ou K_d, nem afetou a reatividade do LIP com monóxido de nitrogênio (NO^•). Portanto, o complexo [FeGS(H₂O)₅] não representa uma fração significativa de CLIP.

The Labile Iron Pool (LIP) represents a ubiquitous, dynamic, and tightly regulated cellular reservoir of Fe(II), homeostatically controlled to be used in the selective metalation of new apo-iron proteins. Despite its significance in iron metabolism, the identity and binding properties of LIP remain uncertain. Assuming that LIP is associated with a cellular constituent C in the form of a complex (CLIP) and using the LIP chelator Calcein (CA), we previously developed a binding model that was experimentally tested in various cell models. The results obtained for the total concentration of C (C_T) and the thermodynamic affinity constant (K<usb>d) of CLIP, calculated from the model, challenge the existing hypothesis that LIP is associated with glutathione (GSH/GS) in the form of the [FeGS(H₂O)₅] complex. This study investigated this hypothesis in more detail in macrophages (RAW 264.7), a cell model relevant to iron metabolism, which exhibits high levels of LIP. The results showed that a more than tenfold reduction in GSH concentration did not alter C_T or K_d, nor did it affect the reactivity of LIP with NO^•. Therefore, the [FeGS(H₂O)₅] complex does not represent a significant fraction of CLIP.