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Dissertação de Mestrado
DOI
10.11606/D.59.2010.tde-10062010-132210
Documento
Autor
Nome completo
Thaís Milena de Souza Bezerra
E-mail
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2010
Orientador
Banca examinadora
Leone, Francisco de Assis (Presidente)
Fontes, Carlos Frederico Leite
Ciancaglini, Pietro
Título em português
Caracterização cinética da (Na+, K+)-ATPase de animais juvenis e adultos durante a ontogenia do camarão de água doce M. amazonicum
Palavras-chave em português
K-ATPase M. amazonicum ontogenia
Na
Resumo em português
No presente trabalho foram estudadas a caracterização cinética e as propriedades bioquímicas da (Na+, K+)-ATPase branquial dos estágios ontogenéticos juvenil e adulto do camarão de água doce M. amazonicum. Em ambos os estágios de desenvolvimento foi expressa uma (Na+, K+)-ATPase com peso molecular de 105 kDa. A estimulação da atividade (Na+, K+)-ATPase de animais adultos pelo ATP apresentou comportamento michaeliano (V=181,8±77,83 U mg-1; KM=0,11±0,01 mmol L-1). Entretanto a estimulação da atividade (Na+, K+)-ATPase pelo Mg2+ (V=174,7±74,76 U mg-1; K0,5=0,27±0,05 mmol L-1; n= 2,5), Na+ (V=175,5±75,12 U mg-1; K0,5=4,73±0,81 mmol L-1; n= 1,9), K+ (V=171,2±73,28 U mg-1; K0,5=1,00±0,17 mmol L-1; n=1,2) e NH4+ (V=194,2±63,34 U mg-1; K0,5= 4,76±2,15 mmol L-1; n=1,9) ocorreu segundo cinética cooperativa. Nos animais juvenis, a modulação da atividade (Na+, K+)-ATPase pelo ATP, também apresentou comportamento michaeliano (V=189,52±32,45 U mg-1; KM= 0,14±0,02 mmol L-1). O mesmo foi observado para o K+ (V=178,56±30,58 U mg-1; KM= 1,30±0,22 mmol L-1) e o NH4+ (V=205,91±35,26 U mg-1; KM=1,88±0,32 mmol L-1). Para o Mg2+ (V=168,35±28,83 U mg-1; K0,5=0,51±0,09 mmol L-1; n=3,5) e o Na+ (V=165,48±28,33 U mg-1; K0,5=4,92±0,84 mmol L-1; n=1,3), a estimulação da enzima ocorreu através de interações sítio-sítio. Na presença de K+ e NH4+ a atividade da enzima de animais adultos, foi estimulada 30% e o K0,5 aumentou 3 vezes. Já os animais juvenis, apresentaram um aumento de 12% na velocidade máxima e o K0,5 aumentou 2 vezes. Na presença de K+ a atividade ATPase total dos animais adultos foi inibida 62% pela ouabaína com Ki=114±2,41 µmol L-1. Já para os animais juvenis, a inibição foi da ordem de 87% com Ki=91,22±15,62 µmol L-1. Na presença de NH4+ a inibição pela ouabaína da atividade ATPase total dos animais adultos foi da ordem de 70% com Ki=57,95±17,04 µmol L-1 enquanto para os juvenis a inibição foi da ordem de 85% com Ki=53,98±9,24 µmol L-1.
Título em inglês
Kinetic characterization of (Na +, K +)-ATPase of juvenile and adult animals during ontogeny of the freshwater shrimp M. amazonicum.
Palavras-chave em inglês
K-ATPase M. amazonicum ontogenic
Na
Resumo em inglês
In the present work the kinetic characterization and biochemical properties of the (Na+, K+)-ATPase gill in ontogenetic stages of juvenile and adult freshwater prawn M. amazonicum was studied. In both stages of development the (Na+, K+)-ATPase was expressed as a molecular weight of 105 kDa. The stimulation of activity (Na+, K+)-ATPase by ATP in adult animals showed a michaeliano comportament (V=181.8±77.83 U mg-1, KM=0.11±0.01 mmol L -1). However the stimulation of activity (Na+, K+)-ATPase by Mg2 + (V=174.7±74.76 U mg-1, K0,5 =0.27±0.05 mmol L-1, n=2.5 ), Na+ (V=175.5±75.12 U mg-1, K0,5=4.73±0.81 mmol L-1, n=1.9), K+ (V =171.2±73,28 U mg-1, K0,5=1.00±0.17 mmol L-1, n=1,2) and NH4+ (V=194.2±63.34 U mg-1, K0,5=4, 76±2.15 mmol L-1, n=1.9) ocorred second cooperative kinetics. In juvenile animals, modulation of the activity (Na+, K+)-ATPase by ATP, exhibited behavior michaeliano (V=189.52±32.45 U mg-1, KM=0.14±0.02 mmol L-1). The same was observed for K+ (V=178.56±30.58 U mg-1, KM=1.30±0.22 mmol L-1) and NH4+ (V=205.91±35.26 U mg -1, KM=1.88±0.32 mmol L-1). For Mg2 + (V=168.35±28.83 U mg-1, K0,5=0.51 ± 0.09 mmol L-1, n=3.5) and Na+ (V=65.48±28 mmol L-1, 33 U mg-1, K0,5=4.92±0.84 mmol L-1, n=1.3), stimulation of the enzyme occurred through site-site interactions. In the presence of K+ and NH4+ the enzyme activity of adult animals, was stimulated 30% and K0,5 increased by 3 times. Already the young animals showed a 12% increase in speed and K0,5 increased by 2 times. In the presence of K+ ATPase activity of the total adult animals was inhibited 62% by ouabain with Ki=114±2.41 mmol L-1. As for the juvenile animals, the inhibition was approximately 87% with Ki=1.22±15.62 mmol L-1. In the presence of NH4+ by ouabain inhibition of total ATPase activity of adult animals was about 70% with Ki=57.95±17.04 mmol L-1 while for juveniles the inhibition was approximately 85% with Ki=53.98 ± 9.24 mmol L-1.
 
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Data de Publicação
2011-02-21
 
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