Os Equivalentes de Pele Reconstituídas têm sido amplamente estudados para obtenção e padronização das técnicas, assim como a utilização em testes de corrosividade e irritação de reagentes e cosméticos, por exemplo, como forma de substituir o uso de animais para esses testes. Também estão sendo desenvolvidos os Modelos de Pele Melanoma, uma vez que a compreensão das células tumorais é mais bem estudada em um sistema que mimetiza a integração das células do melanoma com os demais componentes da pele humana. Esses modelos têm sido utilizados para estudos de progressão tumoral e de desenvolvimento de novas estratégias e tratamentos do tumor. O presente trabalho foi baseado no acoplamento de cultura celular tridimensional de células de melanoma (WM 1617) na forma de esferoides multicelulares e da estrutura tridimensional equivalente dérmico que foi constituído de matriz de colágeno Tipo I e fibroblastos saudáveis. Primeiramente, foi realizado o preparo e caracterização dos esferoides multicelulares utilizando as células WM 35, WM 1552, WM 278 e WM 1617 que representam os estágios de crescimento radial, vertical e metastático do melanoma. Foi observado o preparo com alta reprodutibilidade dos esferoides multicelulares utilizando as células WM 35, WM 278 e WM 1617, enquanto as células WM 1552 não foram possíveis de formar os agregados celulares utilizando o método da gota suspensa. As células WM 1617 foram escolhidas por representar o estágio de crescimento metastático do melanoma. Essas células foram caracterizadas quanto à internalização de NE-AlClPc, assim como a concentração ideal e dose de energia necessária tanto para crescimento em monocamada (2D), quanto para esferoide multicelular (3D). Os esferoides formados foram incluídos em equivalentes dérmicos e foi verificado o comportamento de invasão celular do esferoide dentro da matriz de colágeno. O esferoide multicelular foi tratado com 1,0 µmol L-1 de NE-AlClPc antes de ser incluído ao equivalente dérmico. Após o acoplamento entre os sistemas, o acoplado foi irradiado com luz vermelha na dose de energia de 25 J cm-2 (660 nm) o que ocasionou em morte celular do agregado tumoral e preservação do tecido saudável.

Reconstituted skin has been studied to obtain and standardize techniques and their use in corrosivity and irritation tests of reagents and cosmetics, for example, as a way to replace the use of animals for these tests. Skin Melanoma Models are also being developed since the understanding of tumor cells is better studied in a system that mimics the integration of melanoma cells with other components of human skin. These models have been used for studies of tumor progression and the development of new tumor strategies and treatments. The present work was based on the three-dimensional cell culture coupling of melanoma cells (WM 1617) in the form of multicellular spheroids and the three-dimensional structure consisting of Type I collagen matrix and healthy fibroblasts. First, the preparation and characterization of multicellular spheroids were carried out using WM 35, WM 1552, WM 278 and WM 1617 cells, representing the radial, vertical and metastatic growth stages of melanoma. The preparation with high reproducibility of multicellular spheroids using WM 35, WM 278 and WM 1617 cells was observed, while WM 1552 cells could not form cell aggregates using the hanging drop method. WM 1617 cells were chosen because they represent the metastatic growth stage of melanoma. These cells were characterized for NE-AlClPc uptake, as well as the ideal concentration and energy dose required for both monolayer (2D) and multicellular spheroid (3D) cell death. The spheroids formed were included in dermal equivalents, and the cell invasion behavior of the spheroid within the collagen matrix was verified. The multicellular spheroid was treated with 1.0 µmol L-1 NE-AlClPc before being added to the dermal equivalent. After coupling between the systems, the material was irradiated with a red light at a dose of 25 J cm-2 (660 nm), resulting in cell death of the tumor aggregate and preservation of healthy tissue.