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Dissertação de Mestrado
DOI
https://doi.org/10.11606/D.58.2020.tde-21102022-131514
Documento
Autor
Nome completo
Gabriela Guaraldo Campos Totoli
Unidade da USP
Área do Conhecimento
Data de Defesa
Imprenta
Ribeirão Preto, 2020
Orientador
Banca examinadora
Rosa, Adalberto Luiz (Presidente)
Barros, Celso de
Ferraz, Emanuela Prado
Marchesan, Julie Teresa
Título em português
Efeito da terapia celular com células-tronco mesenquimais da medula óssea e do tecido adiposo na regeneração do tecido ósseo
Palavras-chave em português
Células-tronco mesenquimais
Medula óssea
Regeneração óssea
Tecido adiposo
Tecido ósseo
Terapia celular
Resumo em português
O tecido ósseo é um tecido conjuntivo especializado que apresenta eminente capacidade de reparo, entretanto, em algumas situações a extensão da lesão impede o reparo total deste tecido, sendo este um dos grandes desafios da Odontologia e Medicina. Deste modo, a terapia celular fundamentada na utilização de células-tronco mesenquimais (CTMs) tem se apresentado como uma alternativa promissora. Recentemente, nosso grupo de pesquisa demonstrou que CTMs obtidas de tecido adiposo (CTMs-TA) apresentam perfil gênico mais relacionado à angiogênese, enquanto as CTMs de medula óssea (CTMs-MO) apresentam perfil gênico mais relacionado à osteogênese. Como ambos os processos são fundamentais para se obter a regeneração óssea, o objetivo do presente estudo foi avaliar o potencial da terapia celular baseada em injeções de CTMs-MO e CTMs-TA sobre a formação óssea. Para isso, CTMs-MO obtidas de fêmures e CTMs-TA, da gordura inguinal de ratos foram selecionadas por adesão ao plástico de cultura e caracterizadas como CTMs pela expressão de um painel de marcadores de superfície e a diferenciação nas linhagens osteoblástica e adipocítica. Para avaliar a regeneração do tecido ósseo, defeitos de 5 mm de diâmetro foram criados em calvárias de ratos que foram tratados com injeções locais de CTMs-MO após duas semanas e CTMsTA após seis semanas da criação dos defeitos ou CTMs-TA e CTMs-MO, respectivamente. Animais controle receberam duas injeções de veículo (PBS) nos mesmos períodos. Oito semanas após a primeira injeção, os animais foram eutanasiados e a formação do tecido ósseo foi avaliada por microtomográfia computadorizada e análise histológica. Os dados foram comparados por ANOVA, seguido do teste de Tukey, ou teste t, quando apropriado, considerando o nível de significância de 5% (p≤0,05). As células aderiram ao plástico de cultura com morfologia fibroblastóide, exibiram alta porcentagem de células expressando os marcadores de superfície CD29 e CD90 e baixa porcentagem de células expressando os marcadores CD31, CD34 e CD44, e diferenciação osteoblástica e adipocítica, confirmando serem CTMs. As análises microtomográficas e histológicas mostraram que as injeções locais de CTMs-MO/CTMs-TA ou CTMs-TA/CTMs-MO resultaram em maior formação óssea em comparação com os defeitos que não receberam células. Esses resultados apontam que a terapia celular baseada em injeções locais de CTMs-MO/CTMs-TA ou CTMs-TA/CTMs-MO é efetiva para induzir significativa formação óssea.
Título em inglês
Effect of cell therapy with bone marrow and adipose tissue mesenchymal stem cells on bone tissue regeneration
Palavras-chave em inglês
Adipose tissue
Bone marrow
Bone regeneration
Bone tissue
Cell therapy
Mesenchymal stem cells
Resumo em inglês
Bone tissue is a specialized connective tissue that has an imminent repair capacity, however, in some situations, the extension of the lesion prevents the total repair of this tissue, which is one of the great challenges in Dentistry and Medicine. Thus, cell therapy based on the use of mesenchymal stem cells (MSCs) has been a promising alternative. Recently, our research group reported that adipose tissue MSCs (AT-MSCs) have a gene profile more related to angiogenesis, while bone marrow MSCs (BM-MSCs) have one more related to osteogenesis. As both processes are fundamental to obtain bone regeneration, the aim of the present study was to evaluate the potential of cell therapy based on injections of BM-MSCs and AT-MSCs on bone formation. For that, BM-MSCs from femurs and AT-MSCs from inguinal fat of rats were selected by adherence to the culture plastic and characterized as MSCs by the expression of a panel of surface markers and the differentiation in osteoblastic and adipocytic lineages. To assess bone tissue regeneration, 5-mm defects were created in rat calvaria and treated with local injections of BM-MSCs after two weeks and AT-MSCs after six weeks of their creation or AT-MSCs and BM-MSCs, respectively. Eight weeks after the first injection, the animals were euthanized and bone formation was evaluated by computerized microtomography and histological analyses. The data were compared by ANOVA, followed by the Tukey test, or t test, when appropriate, and the significance level was set at 5% (p≤0.05). The cells adhered to culture plastic with fibroblastoid morphology, exhibited high percentage of cells expressing CD 29 and CD90 and low percentage expressing CD31, CD34 and CD44, in addition to differentiate into osteoblasts and adipocytes, confirming being MSCs. Microtomographic and histological analyses showed that calvaria defects treated with local injections of BM-MSCs/AT-MSCs or AT-MSCs/BM-MSCs presented greater bone formation compared to defects treated without cells. These results indicated that cell therapy based on local injections of BMMSCs/AT-MSCs or AT-MSCs/BM-MSCs is effective in inducing meaningful bone formation.
 
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Data de Publicação
2022-11-04
 
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