Este estudo avaliou o potencial regenerativo de agregados plaquetários obtidos por 3 protocolos diferentes produzidos em equipamentos de centrifugação horizontal (H-PRF) e de ângulo fixo (L-PRF e A-PRF) na neoformação óssea em defeitos de tamanho crítico (DTCs) em calvária de ratos. Previamente à execução do experimento principal, animais adicionais foram utilizados para validação dos protocolos de centrifugação utilizados neste estudo por meio de análise por pipetagem sequencial. Para o experimento principal, 32 ratos foram divididos em quatro grupos: C, L-PRF, A-PRF e H-PRF. Após coleta de sangue dos animais por punção cardíaca, agregados plaquetários foram preparados por protocolos de centrifugação vertical (L-PRF e A-PRF, preparados em centrífuga de ângulo fixo [33° de angulação do rotor, 55mm de raio na altura do coágulo, 86mm de raio máximo]) e horizontal (H-PRF, preparado em centrífuga de rotor basculante). Para o preparo da L-PRF, o sangue foi centrifugado a uma Força Centrífuga Relativa máxima (RCFmax) de 701g (Força G) por 12 minutos; para o preparo da A-PRF, o sangue foi centrifugado a uma RCFmax de 216g, por 14 minutos; o preparo da H-PRF foi realizado pela centrifugação do sangue a uma RCFmax de 700g por 8 minutos. Foram criados DTCs de 5mm de diâmetro nas calvárias dos animais por osteotomia com broca trefina em baixa rotação e irrigação abundante com solução salina estéril. Marcações de amálgama foram feitas para auxiliar a identificação das margens originais do defeito durante o processamento laboratorial. Os defeitos dos grupos C, L-PRF, A-PRF e H-PRF foram preenchidos com coágulo sanguíneo, L-PRF, A-PRF e H-PRF, respectivamente. Aos 14 e 30 dias foram realizadas injeções dos fluorocromos calceína (CA) e alizarina (AL), respectivamente. A eutanásia ocorreu aos 35 dias pós-operatórios. Análises microtomográficas, por microscopia de fluorescência e histomorfométricas foram realizadas. Os dados foram estatisticamente analisados (ANOVA, Tukey, p<0,05). Os grupos L-PRF, A-PRF e H-PRF apresentaram maiores valores de volume ósseo percentual (BV/TV), área de osso neoformado (AON) e maior precipitação de CA e AL do que o grupo C (p<0.05). O grupo H-PRF apresentou maiores valores de BV/TV, número de trabéculas ósseas (Tb.N), AON e maior precipitação de AL do que os grupos A-PRF e L-PRF (p<0,05). Pode-se concluir que: i) os agregados plaquetários L-PRF, A-PRF e H-PRF potencializam a neoformação óssea em DTCs em calvária de ratos; ii) o protocolo de centrifugação horizontal promoveu maior neoformação óssea no tratamento de DTCs criados em calvária de ratos.

This study evaluated the regenerative potential of platelet aggregates obtained by 3 different protocols produced in horizontal (H-PRF) and fixed-angle (L-PRF and A-PRF) centrifuge in bone neoformation in critical size defects (CSDs) in rat calvaria. Prior to the execution of the main experiment, additional animals were used to validate the centrifugation protocols used in this study by sequential pipetting analysis. For the main experiment, 32 rats were divided into four groups: C, L-PRF, A-PRF and H-PRF. After collecting blood from the animals by cardiac puncture, platelet aggregates were prepared by vertical centrifugation protocols (L-PRF and A-PRF, prepared in a fixed-angle centrifuge [33° rotor angle, 55mm radius at the clot height, 86mm maximum radius]) and horizontal (H-PRF, prepared in a swing-out rotor centrifuge). To prepare the L-PRF, the blood was centrifuged at a Relative Centrifugal Force (RCF)-max of 701g (G-force) for 12 minutes; to prepare the A-PRF, the blood was centrifuged at 216g RCFmax for 14 minutes; H-PRF preparation was performed by centrifuging the blood at 700g RCFmax for 8 minutes. 5mm diameter DTCs were created in the animals' calvaria by osteotomy with a trephine drill at low rotation and abundant irrigation with sterile saline solution. Amalgam markings were made to help identify the original margins of the defect during laboratory processing. Defects in groups C, L-PRF, A-PRF and H-PRF were filled with blood clot, L-PRF, A-PRF and H-PRF, respectively. At 14 and 30 days, injections of the fluorochromes calcein (CA) and alizarin (AL) were performed, respectively. Euthanasia took place 35 days after surgery. Microtomographic, fluorescence microscopy and histomorphometric analyzes were performed. Data were statistically analyzed (ANOVA, Tukey, p<0.05). The L-PRF, A-PRF and H-PRF groups showed higher values of percent bone volume (BV/TV), newly formed bone area (NFBA) and greater precipitation of CA and AL than the C group (p<0.05). The H-PRF group showed higher values of BV/TV, number of trabeculae (Tb.N), NFBA and higher precipitation of AL than the A-PRF and L-PRF groups (p<0.05). It can be concluded that: i) platelet aggregates L-PRF, A-PRF and H-PRF potentiate bone neoformation in DTCs in rat calvaria; ii) the horizontal centrifugation protocol promoted greater bone neoformation in the treatment of CSDs created in rat calvaria.