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Thèse de Doctorat
DOI
https://doi.org/10.11606/T.58.2020.tde-06102022-142952
Document
Auteur
Nom complet
Rafaela Cardoso de Sá
Unité de l'USP
Domain de Connaissance
Date de Soutenance
Editeur
Ribeirão Preto, 2020
Directeur
Jury
Sousa Neto, Manoel Damião de (Président)
Pucinelli, Carolina Maschietto
Cury, Alvaro Hafiz
Tanomaru Filho, Mario
Titre en portugais
Avaliação da reação tecidual em subcutâneo de camundongos e expressão gênica de marcadores pró- e anti-inflamatórios após implante de BiodentineTM e MTA
Mots-clés en portugais
BiodentineTM
Interleucina
MTA
Pulpotomia
Subcutâneo
Resumé en portugais
Pulpotomia consiste na remoção da porção coronal de uma polpa vital como forma de preservar a vitalidade da porção radicular restante. Após esse procedimento, diversos materiais têm sido utilizados para o recobrimento da polpa radicular. Desses materiais, destacam-se o agregado trióxido mineral (MTA) e a BiodentineTM. Estudos têm avaliado e comparado a resposta inflamatória de ambos os materiais, a fim de identificarem um material capaz de promover um adequado processo de reparo, sem ação citotóxica ou irritante ao organismo. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a resposta tecidual, resposta imune e participação de citocinas pró- e anti-inflamatórias induzidas pelos materiais BiodentineTM e MTA em tecido conjuntivo subcutâneo de camundongos isogênicos. Para isso, foram utilizados 120 camundongos isogênicos da linhagem BALB/c divididos em 4 grupos, sendo 2 experimentais (BiodentineTM e MTA nos períodos de 7, 21 e 63 dias) e 2 controles (Óxido de Zinco e Eugenol e sham, nos mesmos períodos). Decorridos os períodos experimentais, os blocos de tecido conjuntivo contendo o corpo de prova com o material foram removidos. A parte superior do tecido foi removido, fixado em formol e enviado para o processamento histotécnico de rotina para posterior análise microscópica com H&E. Já a parte inferior do bloco foi mergulhada em solução de RNAlater® para posterior análise da expressão gênica pela técnica de qRT-PCR. Foi realizada a descrição da reação tecidual em contato com cada material, análise semi-quantitativa do fibrosamento e do infiltrado inflamatório e análise quantitativa da espessura do tecido reacional granulomatoso em contato com o material testado ou o tecido conjuntivo do grupo sham. Foi realizado, também, o qRT-PCR para análise de expressão gênica de Il10, Infg, Il6, Tnf e receptor Il1r1. Os resultados foram comparados por meio do teste de KruskalWallis seguido do Pós-teste de Dunn ou pela análise de variância (ANOVA) de duas vias seguido pelo pós-teste de Bonferroni (α=5). Inicialmente os materiais BiodentineTM, MTA induziram um discreto fibrosamento do tecido conjuntivo, mas aos 21 dias ele tornou-se maior ao redor do MTA. Finalmente, no período final, todos os grupos apresentaram um fibrosamento discreto. Em relação ao infiltrado inflamatório, aos 7 dias, BiodentineTM e MTA induziram o recrutamento de células inflamatórias de intensidade moderada a intensa, e nos tempos seguintes a maioria dos espécimes mantiveram-se com infiltrado discreto. A espessura da cápsula fibrosa apresentou-se aumentada ao redor dos espécimes de BiodentineTM aos 7 dias, mas aos 21 e 63 dias, o tecido ao redor dos materiais não apresentou aumento de espessura. Ainda, observou-se que a BiodentineTM e o MTA foram capazes de inibir, ao longo dos períodos experimentais, a expressão dos marcadores pró-inflamatórios Tnf e Infg. Tanto a BiodentineTM quanto o MTA estimularam a expressão de Il6 nos períodos iniciais, mas aos 63 dias, o MTA inibiu a expressão dessa citocina, o que não aconteceu com a Biodentine. Para a Il1r1, a BiodentineTM e MTA não apresentaram efeito aos 7 dias. Aos 21 dias nenhum material modulou a expressão gênica, diferentemente do período de 63 dias quando BiodentineTM, MTA e ZOE induziram Il1r1. Observou-se ainda que a Il-10 teve sua expressão diminuída após estímulo com MTA e ZOE no período de 7 dias. Já aos 21 dias, a Biodentine foi capaz de estimular a expressão de Il-10 e no período final de avaliação apenas o ZOE foi capaz de modular a inibição dessa interleucina. Após análise dos dados, conclui-se que de maneira geral os materiais avaliados, MTA e BiodentineTM, mediaram a inflamação, com aumento do fibrosamento e produção de citocinas pró- e anti-inflamatórias.
Titre en anglais
Tissue reaction evaluation in mice subcutaneous tissue and gene expression of pro- and anti-inflammatory markers after BiodentineTM and MTA implantation
Mots-clés en anglais
BiodentineTM
Interleukin
MTA
Pulpotomy
Subcutaneous
Resumé en anglais
Pulpotomy consists of the vital pulp from coronal portion remoting so as to preserve the vitality of the remaining root portion. After this procedure, several materials have been used to cover the root pulp. Of these materials, the mineral trioxide aggregate (MTA) and BiodentineTM stand out. Studies have evaluated and compared the inflammatory response induced by both materials, in order to identify a material capable of promoting an adequate repair process, without cytotoxic or irritating action to the body. Thus, the aim of this study was to evaluate the tissue response, immune response and participation of pro- and antiinflammatory cytokines induced by BiodentineTM and MTA materials in subcutaneous connective tissue of isogenic mice. For this purpose, 120 isogenic mice of the BALB/c were divided into 4 groups, being 2 experimental (BiodentineTM and MTA in the experimental periods of 7, 21 and 63 days) and 2 controls (Zinc Oxide and Eugenol and sham, using the same periods). After the experimental periods, the blocks containing connective tissue and the used material were removed. The upper part of the tissue was removed, fixed in formaldehyde and sent for routine histotechnical processing for further microscopic analysis with H&E. The lower part of the block was immersed in RNAlater® solution for further analysis of gene expression using the qRT-PCR technique. Were carried out the description of the tissue reaction in contact with each material; semi-quantitative analysis of the collagen fibber formation and inflammatory infiltrate; and quantitative analysis of the connective tissue in contact with the tested material or the sham group. QRT-PCR was also performed for analysis of gene expression of Il10, Infg, Il6, Tnf and Il1r1 receptor. The results were compared using the Kruskal-Wallis test followed by the Dunn post-test or by the two-way ANOVA followed by the Bonferroni post-test (α=5%). Initially, BiodentineTM and MTA induced a slight collagen fibber formation, but at 21 days it became larger around the MTA. Finally, in the final period, all groups had a slight collagen fibber formation. Regarding the inflammatory infiltrate, at 7 days, BiodentineTM and MTA induced the inflammatory cells recruitment from moderate to intense, and in the following times most specimens remained with discrete inflammatory infiltration. The fibrous capsule thickness was increased around the BiodentineTM specimens at 7 days, but at 21 and 63 days, the tissue around the materials did not increase. Furthermore, it was observed that BiodentineTM and MTA were able to inhibit, over the experimental periods, the pro-inflammatory markers, Tnf and Infg, expression. Both, BiodentineTM and MTA, stimulated Il6 expression in the initial periods, but at 63 days, MTA inhibited the expression of this cytokine, which did not happen with Biodentine. For Il1r1, BiodentineTM and MTA had no effect at 7 days. At 21 days, no material modulated gene expression, unlike the 63-day period when BiodentineTM, MTA and ZOE induced Il1r1. It was also observed that IL-10 had its expression decreased after stimulation with MTA and ZOE in the period of 7 days. At 21 days, BiodentineTM was able to stimulate the expression of Il-10 and in the final evaluation period only ZOE was able to modulate the inhibition of this interleukin. After analyzing the data, it was concluded that, in general, the evaluated materials, MTA and BiodentineTM, mediated inflammation, with increased fibrous tissue and production of pro- and anti-inflammatory cytokines.
 
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Date de Publication
2022-10-07
 
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