Disertación de Maestría
DOI
https://doi.org/10.11606/D.5.2022.tde-16082022-113055
Documento
Autor
Nombre completo
Cayuan Tadeu Brandão Pinto
Dirección Electrónica
Instituto/Escuela/Facultad
Área de Conocimiento
Fecha de Defensa
Publicación
São Paulo, 2022
Director
Tribunal
Ekman, Luciana Regina Meireles Jaguaribe (Presidente)
Balian, Simone de Carvalho
Pinto, Pedro Luiz Silva
Razzolini, Maria Tereza Pepe
Título en portugués
Monitoramento de protozoários pertencentes à família Sarcocystidae com potencial zoonótico em amostras comerciais de coração bovino destinadas ao consumo humano
Palabras clave en portugués
Bovinos
Coração
Doenças transmitidas por alimentos
Ensaio de imunoadsorção enzimática
Exsudato cárneo
Microscopia
Reação em cadeia da polimerase
Sarcocystis spp
Segurança alimentar
Toxoplasma gondii
Resumen en portugués
As zoonoses parasitárias transmitidas por alimentos vêm se tornando cada vez mais difundidas mundialmente devido à globalização do comércio de produtos de origem animal, em especial, da carne bovina e seus subprodutos. Isto reforça a importância do monitoramento sanitário da carne, já que este alimento é uma importante fonte de transmissão de protozooses, como a toxoplasmose e a sarcocistose, que além de serem responsáveis por problemas recorrentes de Saúde Pública, também,ocasionam grandes prejuízos à pecuária bovina e à indústria de alimentos. O Brasil carece de um programa nacional de monitoramento laboratorial da carne bovina paraidentificação destas parasitoses. Neste projeto, visamos a identificação de Toxoplasma gondii e Sarcocystis spp. pelo uso de diferentes abordagens laboratoriais,tais como métodos parasitológicos, histológicos, sorológicos e moleculares em 40 amostras de coração bovino obtidos do comércio varejista da cidade de São Paulo. A pesquisa parasitológica para detecção de cistos foi realizada por microscopia óptica convencional e microscopia invertida de contraste após trituração do tecido cardíaco por processamento mecânico. Amostras de tecido cardíaco (n=10) com alta quantidade de cistos detectáveis no exame parasitológico foram inoculadas em camundongos para isolamento dos parasitas. A pesquisa histológica de cistos foi realizada em fragmentos de tecido cardíaco bovino corados por hematoxilina - eosina e a detecção de ácidos nucleicos foi realizada por PCR, utilizando-se iniciadores específicos para o gene COX1 de Sarcocystis spp. e gene B1 de T. gondii. A pesquisa sorológica para detecção de anticorpos IgG foi feita por ELISA, utilizando o exsudato cárneo como material biológico. Nossos dados demonstraram a presença de S. cruzi em 100% das amostras analisadas, porém T. gondii não foi detectado em nenhuma amostra de carne avaliada pelas diferentes abordagens diagnósticas. Foi possível realizar o isolamento de S. cruzi em 20% (2/10) das amostras submetidas ao bioensaio. A sorologia foi a abordagem diagnóstica de menor sensibilidade, apresentando resultados falso-negativos. Os métodos parasitológicos e histológicos foram eficientes na detecção de cistos teciduais, porém apresentaram limitações para diferenciação dos protozoários. Os métodos moleculares apresentaram maior sensibilidade e especificidade, permitindo a identificação das espécies de Sarcocystis spp. e o diagnóstico diferencial com T. gondii. Estes achados fornecem contribuições promissoras para o monitoramento e controle sanitário da carne bovina, fornecendo ferramentas importantes de diagnóstico que poderão auxiliar não só nas tomadas de decisões políticas e alocação de recursos voltados para Segurança Alimentar, mas também na prevenção e controle dessas doenças no homem
Título en inglés
Monitoring of protozoa belonging to the Sarcocystidae family with zoonotic potential in commercial samples of bovine heart destined for human consumption
Palabras clave en inglés
Cattle
Enzyme-linked immunosorbent assay
Food security
Foodborne diseases
Heart
Meat juice
Microscopy
Polymerase chain reaction
Sarcocystis spp
Toxoplasma gondii
Resumen en inglés
Foodborne parasitic zoonosis have become increasingly widespread worldwide due to the globalization of trade in animal products, especially beef. This reinforces the importance of sanitary monitoring of meat, since this food is an important source of transmission of protozoosis, such as toxoplasmosis and sarcocystosis, which are responsible for recurrent Public Health problems and cause great damage to livestock and the food industry. Brazil does not have a national program for laboratory monitoring of beef to identify these parasites. In this project, we aim to identify Toxoplasma gondii and Sarcocystis spp. by the use of different laboratory approaches, such as parasitological, histological, serological and molecular methods in 40 samples of bovine heart obtained from retail trade in the city of São Paulo. Parasitological research for detection of cysts was performed by conventional optical microscopy and inverted contrast microscopy after grinding cardiac tissue by mechanical processing. Heart tissue samples (n=10) with a high amount of detectable cysts in the parasitological examination were inoculated in mice to isolate the parasites. The histological investigation of cysts was performed on fragments of bovine cardiac tissue stained with hematoxylin - eosin and the detection of nucleic acids was performed by PCR, using specific primers for the COX1 gene of Sarcocystis spp. and the B1 gene of T. gondii . Serological research for IgG antibodies was performed by ELISA using meat juice as biological material. Our data demonstrated the presence of S. cruzi in 100% of the samples analyzed, but T. gondii was not detected in any meat sample evaluated by the different diagnostic approaches. It was possible to isolate S. cruzi in 20% (2/10) ofthe samples submitted to the bioassay. Serology was the diagnostic approach with the lowest sensitivity, with false-negative results. The parasitological and histological methods were efficient in the detection of tissue cysts, but they presented limitations for the differentiation of parasites. Molecular methods showed greater sensitivity and specificity, allowing the identification of Sarcocystis species and the differential diagnosis with T. gondii. These findings provide promising contributions to the monitoring and sanitary control of beef, providing important diagnostic tools that can help not only in political decision-making and in allocation of resources for Food Security, but also in the prevention and control of these diseases in humans
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Fecha de Publicación
2022-09-23